抱歉小弟又來了 最近培養細胞又有新的問題 細胞前面幾代長的好好的 但是後來細胞飄的情況變有點嚴重 感覺好像死光了 方法是用貼盤培養 細胞剛分下去還會貼盤 隔天也會長，只是速度稍慢而且會飄一些 再過幾天就越飄越多，最後就全飄了 培養基grace 90% FBS 10% 抗生素 1% 溫度 27蚓 一樣的培養基一樣的細胞一樣的手法 不知道為什麼會這樣 有可能是要拍細下來的時候拍太大力嗎？ 因為不好力道不好控制，有可能每次不太一樣 ※ 引述《s992003 (Lord of Ethanol)》之銘言： : 爬文好像沒看到有人有這個問題 : 小弟最近剛培養的SF9型態上不太正常，有橢圓還有長條狀，甚至還有些特別大(確定不 是 : 污染) : 但是還是硬把它繼代下去，想說看會不會越來越健康，但是結果時好時壞 : 我在解凍之後分了四代，繼代兩次之後長的比較好(大小形狀較一致，圓形) : 想說應該穩定了，結果再分下去型態又開始怪怪的 : 起初有想過培養基有問題(一個月前配製)，但換了培養基之後還是一樣 : 想說可能那批凍的細胞比較不好，所以有解凍另外一批看看，也是一樣的情形 : 小弟的培養基是 : grace 90% : FBS 10% (57度煮30分鐘) : PS 1% : 解凍方式 : 取出液態氮的細胞，在27度水浴下迅速解凍至細胞尚有少許冰晶 : 吸出細胞至離心管，加入10ml預熱的培養基 : 離心，去除液體，再加入10ml預熱的培養基，將細胞沖散 : 再次離心，以去除抗凍劑，接著去除液體，加入10ml培養基沖散並且注入T75 flask中 : 放入27度培養箱中 : 一小時之後換新的培養基，接著20小時後再換一次，24小時再換一次，細胞就長的差不 多 : 了 : 繼代方式是用手拍下來再分盤 : 小弟目前是懷疑溫度的影響，第一個是培養箱開門之後由於細胞培養房的溫度較低，培 養 : 箱會降溫一點，接著為了維持設定的溫度會再升回去，只是升溫後不會剛好停在27度， 會 : 升到28度左右再慢慢降回去，所以整個恆溫系統在開培養箱之後會暫時不太穩定 : 另外是細胞培養房的溫度都是在22度左右，不知道在外面操作時間稍微長一點是否會導 致 : 培養基變冷，還有拿出來的細胞感受到的溫度也太低，只是實驗室培養的其他細胞株都 養 : 的好好的，所以也不確定這個因素有影響 : 由於現在實驗室SF9只剩小弟在養了，也不知道如何是好 : 上網找不太到答案，有阿豆仔說如果細胞庫存夠多，不要花時間把細胞養好，解凍健康 的 : 細胞比較好，但小弟已經試過三批細胞了，感覺情形都差不多 : 細胞不健康就不能繼續做下去…囧 --

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