抱歉小弟又来了 最近培养细胞又有新的问题 细胞前面几代长的好好的 但是後来细胞飘的情况变有点严重 感觉好像死光了 方法是用贴盘培养 细胞刚分下去还会贴盘 隔天也会长，只是速度稍慢而且会飘一些 再过几天就越飘越多，最後就全飘了 培养基grace 90% FBS 10% 抗生素 1% 温度 27蚓 一样的培养基一样的细胞一样的手法 不知道为什麽会这样 有可能是要拍细下来的时候拍太大力吗？ 因为不好力道不好控制，有可能每次不太一样 ※ 引述《s992003 (Lord of Ethanol)》之铭言： : 爬文好像没看到有人有这个问题 : 小弟最近刚培养的SF9型态上不太正常，有椭圆还有长条状，甚至还有些特别大(确定不 是 : 污染) : 但是还是硬把它继代下去，想说看会不会越来越健康，但是结果时好时坏 : 我在解冻之後分了四代，继代两次之後长的比较好(大小形状较一致，圆形) : 想说应该稳定了，结果再分下去型态又开始怪怪的 : 起初有想过培养基有问题(一个月前配制)，但换了培养基之後还是一样 : 想说可能那批冻的细胞比较不好，所以有解冻另外一批看看，也是一样的情形 : 小弟的培养基是 : grace 90% : FBS 10% (57度煮30分钟) : PS 1% : 解冻方式 : 取出液态氮的细胞，在27度水浴下迅速解冻至细胞尚有少许冰晶 : 吸出细胞至离心管，加入10ml预热的培养基 : 离心，去除液体，再加入10ml预热的培养基，将细胞冲散 : 再次离心，以去除抗冻剂，接着去除液体，加入10ml培养基冲散并且注入T75 flask中 : 放入27度培养箱中 : 一小时之後换新的培养基，接着20小时後再换一次，24小时再换一次，细胞就长的差不 多 : 了 : 继代方式是用手拍下来再分盘 : 小弟目前是怀疑温度的影响，第一个是培养箱开门之後由於细胞培养房的温度较低，培 养 : 箱会降温一点，接着为了维持设定的温度会再升回去，只是升温後不会刚好停在27度， 会 : 升到28度左右再慢慢降回去，所以整个恒温系统在开培养箱之後会暂时不太稳定 : 另外是细胞培养房的温度都是在22度左右，不知道在外面操作时间稍微长一点是否会导 致 : 培养基变冷，还有拿出来的细胞感受到的温度也太低，只是实验室培养的其他细胞株都 养 : 的好好的，所以也不确定这个因素有影响 : 由於现在实验室SF9只剩小弟在养了，也不知道如何是好 : 上网找不太到答案，有阿豆仔说如果细胞库存够多，不要花时间把细胞养好，解冻健康 的 : 细胞比较好，但小弟已经试过三批细胞了，感觉情形都差不多 : 细胞不健康就不能继续做下去…囧 --

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