1. 拿 HBV 當模板，應該是指 virus genome 來當做來源。而且你在後面也 說到你們一般是以 copies/ul 來當作計量單位，這通常是已經使用其他 PCR 方式測出 titer 的樣本，像是 q-PCR等等。而 10^8 copies/ul 這種 標示，應該是準備拿來感染細胞或動物之類的基準量。但說實在的，一般 PCR template 並不會拿這麼多，一定會再稀釋。 2. 拿 plasmid DNA 當模板，是因為一般 PCR 放大是準備看特殊片斷，特 別是已經被研究過的對象。你之所以提到 plasmid DNA，是因為有其他學姊 和你說。我猜她是在幫你釐清你的問題，所以才會建議拿個 plasmid 來 測。一般建議拿 plasmid DNA，是因為我們在研究過程中經常會將有興趣的 DNA 片段塞到適合的 plasmid DNA 之中。而學姊的建議應該是拿一個含有 你要放大片段 (片段是來自於 HBV) 的 plasmid DNA 來當模版，而不是一 個含有整個 HBV genome 的載體。Plasmid DNA 的品質可以比較純，所以拿 來當 PCR 時的模板就可以減少誤差，也可以用來檢驗 PCR 條件。Plasmid DNA 的製備，一般是使用 E.coli，經濟和技術方便性考量。 3. 你家 primer 不可能長到 400 nt. 以上，你應該是記錯了，它比較像是 你 PCR 產物的大小。特別是像 HBV 這個被研究了很久的病毒，很多偵測用 的 primers 可以從相關文獻得到，不用再特別設計，除非有其他特殊的實 驗需求。同時，PCR 條件可以參考那些文獻來進行。而你看到的應該就是 primer dimers 的訊號，要重新調整 PCR 條件，或是重新訂購/設計 primers。一般不會有什麼大問題。有問題的大概就是東西品質和技術。前 面也有網友提供其他意見，如果是機台問題，那是機台要修了。實驗室最好 是有學長姊可以問，要不然問老闆也行。沒有學長姊可以當場問的話，那會 很辛苦。 4. 單位的換算，你可以把 plasmid DNA 的一般計量從 microgram/ microliter 換算成 copies/ul，但其他領域一般不會這樣做。在你檢驗 PCR 條件的時候，似乎也沒必要這麼做。如果是其他 PCR 條件，那問題並 不在於你要不要換算單位。 == 要看 PCR 條件，就拿個 plasmid DNA 來測試。你們實驗室有 HBV genome DNA，那應該也多多少少也能取得相關的 plasmid DNA 來當測試模板。拿 viroids/virus particles 或以 copies/ul 為計量單位的樣本，感覺有點 浪費又有些危險。你的問題應該是在於相關的 PCR 條件，目前看來應該是 機器的關係，先從那裡看看吧。 --

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