1. 拿 HBV 当模板，应该是指 virus genome 来当做来源。而且你在後面也 说到你们一般是以 copies/ul 来当作计量单位，这通常是已经使用其他 PCR 方式测出 titer 的样本，像是 q-PCR等等。而 10^8 copies/ul 这种 标示，应该是准备拿来感染细胞或动物之类的基准量。但说实在的，一般 PCR template 并不会拿这麽多，一定会再稀释。 2. 拿 plasmid DNA 当模板，是因为一般 PCR 放大是准备看特殊片断，特 别是已经被研究过的对象。你之所以提到 plasmid DNA，是因为有其他学姊 和你说。我猜她是在帮你厘清你的问题，所以才会建议拿个 plasmid 来 测。一般建议拿 plasmid DNA，是因为我们在研究过程中经常会将有兴趣的 DNA 片段塞到适合的 plasmid DNA 之中。而学姊的建议应该是拿一个含有 你要放大片段 (片段是来自於 HBV) 的 plasmid DNA 来当模版，而不是一 个含有整个 HBV genome 的载体。Plasmid DNA 的品质可以比较纯，所以拿 来当 PCR 时的模板就可以减少误差，也可以用来检验 PCR 条件。Plasmid DNA 的制备，一般是使用 E.coli，经济和技术方便性考量。 3. 你家 primer 不可能长到 400 nt. 以上，你应该是记错了，它比较像是 你 PCR 产物的大小。特别是像 HBV 这个被研究了很久的病毒，很多侦测用 的 primers 可以从相关文献得到，不用再特别设计，除非有其他特殊的实 验需求。同时，PCR 条件可以参考那些文献来进行。而你看到的应该就是 primer dimers 的讯号，要重新调整 PCR 条件，或是重新订购/设计 primers。一般不会有什麽大问题。有问题的大概就是东西品质和技术。前 面也有网友提供其他意见，如果是机台问题，那是机台要修了。实验室最好 是有学长姊可以问，要不然问老板也行。没有学长姊可以当场问的话，那会 很辛苦。 4. 单位的换算，你可以把 plasmid DNA 的一般计量从 microgram/ microliter 换算成 copies/ul，但其他领域一般不会这样做。在你检验 PCR 条件的时候，似乎也没必要这麽做。如果是其他 PCR 条件，那问题并 不在於你要不要换算单位。 == 要看 PCR 条件，就拿个 plasmid DNA 来测试。你们实验室有 HBV genome DNA，那应该也多多少少也能取得相关的 plasmid DNA 来当测试模板。拿 viroids/virus particles 或以 copies/ul 为计量单位的样本，感觉有点 浪费又有些危险。你的问题应该是在於相关的 PCR 条件，目前看来应该是 机器的关系，先从那里看看吧。 --

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