作者wenyong (阿揚~)
看板Biotech
標題[求救] EMSA卡well
時間Mon May 4 15:58:25 2015
發問時請注意，若是要問實驗相關的問題，請將實驗的步驟、所用的條件大致列出
以方便板友幫您追蹤問題
若是求救事項涉及實驗室智慧財產(例如細胞細菌植株、質體載體等）之分讓，
請務必註明貴實驗室願意設立 正式合作或 簽署材料分讓協議(MTA)，否則版工將逕行刪除
----請將上列注意事項以 ctrl + k 刪除後開始編輯文章----
請問各位大大,
我目前在做EMSA 實驗, DNA 22bp, protein 200 kD
目前跑出的圖
http://imgur.com/1lJZLCL
DNA 拖尾已經解決, 但是一直困擾我的是 右側 隨著protein濃度變高
shift程度越明顯, 可是都卡well
感覺是有binding, 但卡well不一定是因為binding
不知道有沒有什麼辦法 能夠解決 卡well的情形
目前試過 5% PAGE, 8% PAGE, 1.5% agarose
都會卡
請求解答
謝謝
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1F：→ Ice9: 要不要算一下 Protein 的帶電值是多少？帶正電跑不下去是正 05/04 16:05
2F：→ Ice9: 常的啊。另外，protein 容易multimerized也是可能原因。再來 05/04 16:08
3F：→ Ice9: 就是 protein aggregation 問題也要排除。還有就是依protein 05/04 16:11
4F：→ Ice9: pI 值來調整電泳時的 buffer pH value。 05/04 16:15
5F：→ Ice9: 對了，我還有見過調整acryamide比例的 protocol，不一定都一 05/04 16:20
6F：→ Ice9: 直是 29:1 的混合比例。你要不要再調高？ 05/04 16:20
7F：推 kcy7427p: 電壓？跑多久？ 09/01 22:49