作者wenyong (阿扬~)
看板Biotech
标题[求救] EMSA卡well
时间Mon May 4 15:58:25 2015
发问时请注意，若是要问实验相关的问题，请将实验的步骤、所用的条件大致列出
以方便板友帮您追踪问题
若是求救事项涉及实验室智慧财产(例如细胞细菌植株、质体载体等）之分让，
请务必注明贵实验室愿意设立 正式合作或 签署材料分让协议(MTA)，否则版工将迳行删除
----请将上列注意事项以 ctrl + k 删除後开始编辑文章----
请问各位大大,
我目前在做EMSA 实验, DNA 22bp, protein 200 kD
目前跑出的图
http://imgur.com/1lJZLCL
DNA 拖尾已经解决, 但是一直困扰我的是 右侧 随着protein浓度变高
shift程度越明显, 可是都卡well
感觉是有binding, 但卡well不一定是因为binding
不知道有没有什麽办法 能够解决 卡well的情形
目前试过 5% PAGE, 8% PAGE, 1.5% agarose
都会卡
请求解答
谢谢
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc), 来自: 140.112.130.20
※ 文章网址: https://webptt.com/cn.aspx?n=bbs/Biotech/M.1430726308.A.A94.html
1F：→ Ice9: 要不要算一下 Protein 的带电值是多少？带正电跑不下去是正 05/04 16:05
2F：→ Ice9: 常的啊。另外，protein 容易multimerized也是可能原因。再来 05/04 16:08
3F：→ Ice9: 就是 protein aggregation 问题也要排除。还有就是依protein 05/04 16:11
4F：→ Ice9: pI 值来调整电泳时的 buffer pH value。 05/04 16:15
5F：→ Ice9: 对了，我还有见过调整acryamide比例的 protocol，不一定都一 05/04 16:20
6F：→ Ice9: 直是 29:1 的混合比例。你要不要再调高？ 05/04 16:20
7F：推 kcy7427p: 电压？跑多久？ 09/01 22:49