作者guest999 (I'm guest)
看板Biotech
標題[求救] qPCR的CT值與data牢靠性
時間Tue Feb 10 23:41:59 2015
我是real time PCR新手
想來請教大家下面幾個data處理和判讀問題
計算方式是用相對定量
internal control是用 Gapdh
遇到的問題是:
1. 實驗結果的CT值好像都會有浮動現象，
一般來說，怎樣的數據結果是可用的，是否有criteria可以參照?
internal control的變異性必須在怎樣的固定範圍內,其數據的RQ值才可信賴
例如 Gapdh CT值需落於20-30之間，甚至於23-27標準
2. real time PCR這種實驗，怎樣的數據才算是一個牢靠性夠的結果?
除了3重複可使實驗現象的有再現性，還有什麼需要注意的地方?
比方做western blot 大家都希望internal control 的band是較一致的，
這樣大家才願意去相信他的實驗結果
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※ 編輯: guest999 (114.27.41.76), 02/10/2015 23:44:59
1F：推 liuse: 三重複後算t-test 結果有星星就放paper了阿 02/11 02:39
2F：推 Ianthegood: 三個well沒有差太多就好 這種東西你敢放我就敢信 02/11 09:09
4F：推 Ezc: CT值受細胞數量影響很大，應該不會有固定範圍 02/26 02:46
5F：→ Ezc: 有些實驗室則會把total RNA量稀釋到極相近再測 02/26 02:48
6F：→ Ezc: 還有同樓上說的，qPCR算是大家還滿相信的了 02/26 02:49