作者guest999 (I'm guest)
看板Biotech
标题[求救] qPCR的CT值与data牢靠性
时间Tue Feb 10 23:41:59 2015
我是real time PCR新手
想来请教大家下面几个data处理和判读问题
计算方式是用相对定量
internal control是用 Gapdh
遇到的问题是:
1. 实验结果的CT值好像都会有浮动现象，
一般来说，怎样的数据结果是可用的，是否有criteria可以参照?
internal control的变异性必须在怎样的固定范围内,其数据的RQ值才可信赖
例如 Gapdh CT值需落於20-30之间，甚至於23-27标准
2. real time PCR这种实验，怎样的数据才算是一个牢靠性够的结果?
除了3重复可使实验现象的有再现性，还有什麽需要注意的地方?
比方做western blot 大家都希望internal control 的band是较一致的，
这样大家才愿意去相信他的实验结果
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc), 来自: 114.27.41.76
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※ 编辑: guest999 (114.27.41.76), 02/10/2015 23:44:59
1F：推 liuse: 三重复後算t-test 结果有星星就放paper了阿 02/11 02:39
2F：推 Ianthegood: 三个well没有差太多就好 这种东西你敢放我就敢信 02/11 09:09
4F：推 Ezc: CT值受细胞数量影响很大，应该不会有固定范围 02/26 02:46
5F：→ Ezc: 有些实验室则会把total RNA量稀释到极相近再测 02/26 02:48
6F：→ Ezc: 还有同楼上说的，qPCR算是大家还满相信的了 02/26 02:49