自從學姐畢業後就問題不斷阿(淚 我們實驗室長期使用C2C12 cell 之前我在培養時也沒什麼問題 但是最近細胞只要一回溶完 經過一次passage後 細胞就會變得很奇怪 看起來就是有點傾向老化，細胞會攤成一片的樣子 或者是會變得細細長長的，從細胞邊緣會延伸出很長一條 這樣下去根本不知道細胞能不能用(淚 使用的medium: DMEM 10% FBS 4mM L-glutamine 1% P/S 此外 最近我的S.A Beta-gal也染不出來(嘆 用的是sigma的Kit Protocol:(6孔盤) 1.PBS wash 2 times 2.加入1.5ml 1X Fixation buffer 靜置6-7min 3.配6ml staining solution mix: 10X staining solution 600ul reagent B 75ul reagent C 75ul X-gal solution 150ul 滅菌水 5.1ml 避光配製，過0.22filter，調pH到5.9-6.0之間 4.PBS wash 3 times，洗掉fixation buffer 5.每well加入1ml的staining solution mix 6.封parafilm1，包鋁箔在37度incubator(無CO2) 放置1-2天 7.用PBS wash後，用70% glycerol保存 不知道為什麼都染不到東西，就算有也只有1.2顆 有些很明顯老化的細胞竟然也都沒染到!! 請各位版友幫我看看是否有哪些我沒注意到的問題 謝謝!!! --

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