自从学姐毕业後就问题不断阿(泪 我们实验室长期使用C2C12 cell 之前我在培养时也没什麽问题 但是最近细胞只要一回溶完 经过一次passage後 细胞就会变得很奇怪 看起来就是有点倾向老化，细胞会摊成一片的样子 或者是会变得细细长长的，从细胞边缘会延伸出很长一条 这样下去根本不知道细胞能不能用(泪 使用的medium: DMEM 10% FBS 4mM L-glutamine 1% P/S 此外 最近我的S.A Beta-gal也染不出来(叹 用的是sigma的Kit Protocol:(6孔盘) 1.PBS wash 2 times 2.加入1.5ml 1X Fixation buffer 静置6-7min 3.配6ml staining solution mix: 10X staining solution 600ul reagent B 75ul reagent C 75ul X-gal solution 150ul 灭菌水 5.1ml 避光配制，过0.22filter，调pH到5.9-6.0之间 4.PBS wash 3 times，洗掉fixation buffer 5.每well加入1ml的staining solution mix 6.封parafilm1，包铝箔在37度incubator(无CO2) 放置1-2天 7.用PBS wash後，用70% glycerol保存 不知道为什麽都染不到东西，就算有也只有1.2颗 有些很明显老化的细胞竟然也都没染到!! 请各位版友帮我看看是否有哪些我没注意到的问题 谢谢!!! --

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