作者godinal (無心)
看板Biotech
標題[求救] qPCR檢體放於冰桶上太久是否會影響結果
時間Fri Dec 27 13:09:01 2013
最近又發生positive control無法順利產生signal的囧境
今天因為想省時間, 想和同事一起上機
當我把qPCR的reagent全部都加好後, 放在冰桶上(沒有插在冰裡)將近一個小時
同事的結果有出來...但我做的所有檢體皆無訊號
到底是我的reagent出了問題?? 還是Taq enzyme在室溫太久已經沒有活性了??
請問各位前輩有沒有這種經驗..
麻煩幫忙解惑一下
感恩
謝謝
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.96.146.109
1F：推 qiet:Taq能拿來跑PCR溫度上上下下一兩個小時都撐的過去了 12/27 21:26
2F：→ qiet:只是放室溫一小時就算有影響也不至於會到沒有訊號 12/27 21:27
3F：→ Ianthegood:還是sybr壞了 12/27 23:14
4F：推 huangsw:那個廠牌的機器？ abi可以讀原始檔判斷狀況 12/28 00:44
5F：→ godinal:重做了一次...PC還是沒出來...完全理不出頭緒... 12/28 20:22
6F：→ godinal:難不成又是primer的問題??明明之前做72度就很順 12/28 20:23
7F：→ godinal:annealing硬是被改到64度...這應該無關吧!! 12/28 20:23
8F：→ roy047:Annealing溫度才是重點吧? 與primer Tm值密切相關 12/30 01:32
9F：→ godinal:照前輩的說法..每次合成primer(一樣序列).. 12/30 08:38
10F：→ godinal:annealing溫度都要重新捉...超怪的... 12/30 08:39
11F：→ godinal:我拿的這批primer之前72度做都沒事 12/30 08:39
12F：→ godinal:但前輩合成的新primer...72度做不出來..改成64度.就很怪 12/30 08:40
13F：→ roy047:第一次聽到這種說法ORZ Tm影響最大的除了seq還有所用的 12/30 17:53
14F：→ roy047:polymerase & buffer種類 12/30 17:53