作者godinal (无心)
看板Biotech
标题[求救] qPCR检体放於冰桶上太久是否会影响结果
时间Fri Dec 27 13:09:01 2013
最近又发生positive control无法顺利产生signal的囧境
今天因为想省时间, 想和同事一起上机
当我把qPCR的reagent全部都加好後, 放在冰桶上(没有插在冰里)将近一个小时
同事的结果有出来...但我做的所有检体皆无讯号
到底是我的reagent出了问题?? 还是Taq enzyme在室温太久已经没有活性了??
请问各位前辈有没有这种经验..
麻烦帮忙解惑一下
感恩
谢谢
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.96.146.109
1F：推 qiet:Taq能拿来跑PCR温度上上下下一两个小时都撑的过去了 12/27 21:26
2F：→ qiet:只是放室温一小时就算有影响也不至於会到没有讯号 12/27 21:27
3F：→ Ianthegood:还是sybr坏了 12/27 23:14
4F：推 huangsw:那个厂牌的机器？ abi可以读原始档判断状况 12/28 00:44
5F：→ godinal:重做了一次...PC还是没出来...完全理不出头绪... 12/28 20:22
6F：→ godinal:难不成又是primer的问题??明明之前做72度就很顺 12/28 20:23
7F：→ godinal:annealing硬是被改到64度...这应该无关吧!! 12/28 20:23
8F：→ roy047:Annealing温度才是重点吧? 与primer Tm值密切相关 12/30 01:32
9F：→ godinal:照前辈的说法..每次合成primer(一样序列).. 12/30 08:38
10F：→ godinal:annealing温度都要重新捉...超怪的... 12/30 08:39
11F：→ godinal:我拿的这批primer之前72度做都没事 12/30 08:39
12F：→ godinal:但前辈合成的新primer...72度做不出来..改成64度.就很怪 12/30 08:40
13F：→ roy047:第一次听到这种说法ORZ Tm影响最大的除了seq还有所用的 12/30 17:53
14F：→ roy047:polymerase & buffer种类 12/30 17:53