作者xhunterx (藍雨飄楓)
看板Biotech
標題[求救] western blot 做膠
時間Sun Dec 15 12:37:57 2013
小弟最近要跑分子量 170kDa的蛋白
做膠時網路查到是用7.5% 但是實際操作後 發現gel很難凝固..
想請問一下有人有做過那麼大分子量的Western嗎?
可以建議配膠濃度可以給小弟嗎?
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 120.126.53.153
1F：推 huangsw:不凝固先從APS TEMED開始抓問題吧 12/15 15:06
2F：推 JFhorner:是用29:1的acrylamide嗎? 常用的37.5:1配低濃度比較難凝! 12/15 17:38
3F：→ blence:"常用的37.5:1"....明明這個比例就沒什麼人用 12/15 18:35
4F：推 marvelous13:不會啊…周遭的人都用37.5：1 12/15 19:52
5F：→ martyrtitan:29和37.5都很常用..我想是APS放太久了 或者膠冰太久 12/15 20:16
6F：→ martyrtitan:Acrylamide+buffer配好冰太久會凝得很差 12/15 20:17
7F：推 icome:應該不會有這種問題 可能天氣冷凝比較慢? 12/15 23:23
8F：→ blence:我的160kd是用8%就好,7.5%是給250kd用的,不過你應該放配方 12/16 01:05
9F：推 JFhorner:blence好兇>< 我們平常都用37.5, 29是之前有人做4%native 12/16 11:30
10F：→ JFhorner:gel凝不起來才買來用的@@ 12/16 11:31
謝謝各位!! ^^ 最後發現是APS問題
※ 編輯: xhunterx 來自: 120.126.53.153 (12/16 22:00)
11F：→ roy047:APS最容易壞 建議一段時間就重配一次 12/16 22:28
12F：推 Evilnfs:APS每次新鮮現配最好 不會花太多時間的 12/17 04:37
13F：推 wing00123:現配的最好 12/17 07:50
14F：推 leoblack:APS配好後分裝凍-20保存,使用中的就放4度 12/17 10:02
15F：→ joseph103331:180用10%都馬可以跑.... 12/18 01:10
16F：→ htLiu:配到6%都會凝,只是會很軟,TRENSFER要非常小心破掉 12/23 12:45
17F：推 mayjasty:之前有遇過沒加Bis 12/24 23:16