作者xhunterx (蓝雨飘枫)
看板Biotech
标题[求救] western blot 做胶
时间Sun Dec 15 12:37:57 2013
小弟最近要跑分子量 170kDa的蛋白
做胶时网路查到是用7.5% 但是实际操作後 发现gel很难凝固..
想请问一下有人有做过那麽大分子量的Western吗?
可以建议配胶浓度可以给小弟吗?
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 120.126.53.153
1F：推 huangsw:不凝固先从APS TEMED开始抓问题吧 12/15 15:06
2F：推 JFhorner:是用29:1的acrylamide吗? 常用的37.5:1配低浓度比较难凝! 12/15 17:38
3F：→ blence:"常用的37.5:1"....明明这个比例就没什麽人用 12/15 18:35
4F：推 marvelous13:不会啊…周遭的人都用37.5：1 12/15 19:52
5F：→ martyrtitan:29和37.5都很常用..我想是APS放太久了 或者胶冰太久 12/15 20:16
6F：→ martyrtitan:Acrylamide+buffer配好冰太久会凝得很差 12/15 20:17
7F：推 icome:应该不会有这种问题 可能天气冷凝比较慢? 12/15 23:23
8F：→ blence:我的160kd是用8%就好,7.5%是给250kd用的,不过你应该放配方 12/16 01:05
9F：推 JFhorner:blence好凶>< 我们平常都用37.5, 29是之前有人做4%native 12/16 11:30
10F：→ JFhorner:gel凝不起来才买来用的@@ 12/16 11:31
谢谢各位!! ^^ 最後发现是APS问题
※ 编辑: xhunterx 来自: 120.126.53.153 (12/16 22:00)
11F：→ roy047:APS最容易坏 建议一段时间就重配一次 12/16 22:28
12F：推 Evilnfs:APS每次新鲜现配最好 不会花太多时间的 12/17 04:37
13F：推 wing00123:现配的最好 12/17 07:50
14F：推 leoblack:APS配好後分装冻-20保存,使用中的就放4度 12/17 10:02
15F：→ joseph103331:180用10%都马可以跑.... 12/18 01:10
16F：→ htLiu:配到6%都会凝,只是会很软,TRENSFER要非常小心破掉 12/23 12:45
17F：推 mayjasty:之前有遇过没加Bis 12/24 23:16