作者otota (武家傳奏)
看板Biotech
標題[求救] 有關於非E.Coli系統的competent cell製備方法
時間Mon Dec 9 11:51:04 2013
在下目前要進行E.Coli以外的菌種的competent cell的製備
目前要做的菌種有Bacillus sp., Pantoea sp.,以及Sphingomonas sp.
以便接下來進行transformation的步驟(heat shock的)
雖然已經嘗試使用一般E.Coli的勝任細胞製作法(CaCl2的方式)
並且以抗生素Amp進行篩選
但感覺transformation之後效率不高，或者是之後的plasmid DNA萃取上沒有目標物
著實困擾
於是想請問一下版上的大大們
對於E.Coli以外的菌種Competent Cell 製備是否有其他的方式可以進行
以及是否有其他要注意的地方或細節
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.130.9.8
1F：→ chl20020933:不會查paper? 12/09 14:53
2F：→ otota:paper有查過了，但他那邊是用電穿孔，而不是heat shock 12/09 15:44
3F：推 milkpa:就是因為不好送才不用化學法...... 12/09 15:52
4F：→ otota:嗯...目前是有操作過轉型前跟轉型後的塗盤(with Amp)，轉型 12/09 15:58
5F：→ otota:前沒有colony出現，而轉型後的有出現，這樣算是成功嗎?還是 12/09 15:59
6F：→ otota:這種為Psudo的情況？ 12/09 15:59
7F：→ chl20020933:g+細菌用化學法要先處理成protoplast不會比較好用 12/09 16:19
8F：→ chl20020933:而且不是所有細菌都可以處理成有competence能力 12/09 16:21