作者otota (武家传奏)
看板Biotech
标题[求救] 有关於非E.Coli系统的competent cell制备方法
时间Mon Dec 9 11:51:04 2013
在下目前要进行E.Coli以外的菌种的competent cell的制备
目前要做的菌种有Bacillus sp., Pantoea sp.,以及Sphingomonas sp.
以便接下来进行transformation的步骤(heat shock的)
虽然已经尝试使用一般E.Coli的胜任细胞制作法(CaCl2的方式)
并且以抗生素Amp进行筛选
但感觉transformation之後效率不高，或者是之後的plasmid DNA萃取上没有目标物
着实困扰
於是想请问一下版上的大大们
对於E.Coli以外的菌种Competent Cell 制备是否有其他的方式可以进行
以及是否有其他要注意的地方或细节
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.130.9.8
1F：→ chl20020933:不会查paper? 12/09 14:53
2F：→ otota:paper有查过了，但他那边是用电穿孔，而不是heat shock 12/09 15:44
3F：推 milkpa:就是因为不好送才不用化学法...... 12/09 15:52
4F：→ otota:嗯...目前是有操作过转型前跟转型後的涂盘(with Amp)，转型 12/09 15:58
5F：→ otota:前没有colony出现，而转型後的有出现，这样算是成功吗?还是 12/09 15:59
6F：→ otota:这种为Psudo的情况？ 12/09 15:59
7F：→ chl20020933:g+细菌用化学法要先处理成protoplast不会比较好用 12/09 16:19
8F：→ chl20020933:而且不是所有细菌都可以处理成有competence能力 12/09 16:21