作者ttgsh (寶)
看板Biotech
標題[求救] RNA抽取問題
時間Wed Nov 27 14:33:02 2013
請問一下大家在RNA isopropanol沉澱的時候
離完心會發生pallet變一大片的情形嗎??
在eppendorf中不是形成塊狀的沉澱
而是分散的情況???
想請問可能是前面哪個步驟出錯了
流程
trizol 1ml 5min
200ul chloroform mix 靜置3 min
取上清液與isopropanol 1:1 mix
-20度C 1hr後離心 12000rpm 15min
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 163.25.90.92
1F：→ Ianthegood:po個圖來吧 11/27 16:49
2F：推 Inzaghi0227:有時候你的細胞數太少,收到的RNA就更少,所以異丙醇 11/27 18:19
3F：→ Inzaghi0227:離心完很可能看不到明顯的沉澱物,做法是直接用倒掉上 11/27 18:20
4F：→ Inzaghi0227:清液的方式,慢慢倒,底下會有一小團透明狀,流動性較低 11/27 18:21
5F：→ Inzaghi0227:那個就是RNA 11/27 18:22
6F：→ puec2:其實快快倒也不會不見 慢慢倒還怕他會飄起來 11/27 18:35
7F：推 CD133:你chloroform靜置完後有離心嗎?應該要12000rpm離心後， 11/28 08:47
8F：→ CD133:取上清液，再加入isopropanol 11/28 08:48
9F：→ ttgsh:有離心~ 但是完全沒看到透明狀，加了酒精後還有點黃黃的 11/28 11:12
11F：→ ttgsh:補上照片 不過不知道清不清楚> < 11/28 11:47
12F：推 CD133:我說的離心是在你加入chloroform之後喔，不是加isopropanol 11/28 11:58
13F：→ CD133:因為照片上看到的是你加入isopropanol離心過後的樣子 11/28 11:59
14F：→ CD133:你原文的步驟中在加入chloroform靜置3分鐘後就直接取上清液 11/28 12:00
15F：→ CD133:如果你一切的步驟都正確，那就可能是你的細胞量太多。 11/28 12:01
16F：→ CD133:最後建議你要帶手套拿管子，畢竟是做RNA的實驗，小心一點好 11/28 12:02
17F：→ CD133:不過你的指甲套很可愛就是了.... 11/28 12:02
18F：→ hensu:真的要戴手套...不只是保護RNA也保護自己..不要沾到有機溶劑 11/28 13:32
19F：→ ttgsh:步驟是我忘了寫上! 加完chloform後有離心~ 11/28 14:21
20F：→ ttgsh:細胞太多管壁會有這種現象嗎?? 但沉澱出的pallet很小耶~ 11/28 14:24
21F：→ ttgsh:只是為了拍照方便,在操作的時候還是都有戴手套的 XD 11/28 14:25
22F：→ Ianthegood:isop後離30min看看 11/28 15:58
23F：推 leoblack:操作RNA請全程戴手套+口罩~必要時請噴酒精 11/28 22:48
24F：推 huuban:我也看過分散在管壁上，結果品質莫名其妙的好 11/30 02:01