作者ttgsh (宝)
看板Biotech
标题[求救] RNA抽取问题
时间Wed Nov 27 14:33:02 2013
请问一下大家在RNA isopropanol沉淀的时候
离完心会发生pallet变一大片的情形吗??
在eppendorf中不是形成块状的沉淀
而是分散的情况???
想请问可能是前面哪个步骤出错了
流程
trizol 1ml 5min
200ul chloroform mix 静置3 min
取上清液与isopropanol 1:1 mix
-20度C 1hr後离心 12000rpm 15min
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 163.25.90.92
1F：→ Ianthegood:po个图来吧 11/27 16:49
2F：推 Inzaghi0227:有时候你的细胞数太少,收到的RNA就更少,所以异丙醇 11/27 18:19
3F：→ Inzaghi0227:离心完很可能看不到明显的沉淀物,做法是直接用倒掉上 11/27 18:20
4F：→ Inzaghi0227:清液的方式,慢慢倒,底下会有一小团透明状,流动性较低 11/27 18:21
5F：→ Inzaghi0227:那个就是RNA 11/27 18:22
6F：→ puec2:其实快快倒也不会不见 慢慢倒还怕他会飘起来 11/27 18:35
7F：推 CD133:你chloroform静置完後有离心吗?应该要12000rpm离心後， 11/28 08:47
8F：→ CD133:取上清液，再加入isopropanol 11/28 08:48
9F：→ ttgsh:有离心~ 但是完全没看到透明状，加了酒精後还有点黄黄的 11/28 11:12
11F：→ ttgsh:补上照片 不过不知道清不清楚> < 11/28 11:47
12F：推 CD133:我说的离心是在你加入chloroform之後喔，不是加isopropanol 11/28 11:58
13F：→ CD133:因为照片上看到的是你加入isopropanol离心过後的样子 11/28 11:59
14F：→ CD133:你原文的步骤中在加入chloroform静置3分钟後就直接取上清液 11/28 12:00
15F：→ CD133:如果你一切的步骤都正确，那就可能是你的细胞量太多。 11/28 12:01
16F：→ CD133:最後建议你要带手套拿管子，毕竟是做RNA的实验，小心一点好 11/28 12:02
17F：→ CD133:不过你的指甲套很可爱就是了.... 11/28 12:02
18F：→ hensu:真的要戴手套...不只是保护RNA也保护自己..不要沾到有机溶剂 11/28 13:32
19F：→ ttgsh:步骤是我忘了写上! 加完chloform後有离心~ 11/28 14:21
20F：→ ttgsh:细胞太多管壁会有这种现象吗?? 但沉淀出的pallet很小耶~ 11/28 14:24
21F：→ ttgsh:只是为了拍照方便,在操作的时候还是都有戴手套的 XD 11/28 14:25
22F：→ Ianthegood:isop後离30min看看 11/28 15:58
23F：推 leoblack:操作RNA请全程戴手套+口罩~必要时请喷酒精 11/28 22:48
24F：推 huuban:我也看过分散在管壁上，结果品质莫名其妙的好 11/30 02:01