作者brigand (台灣加油)
看板Biotech
標題[求救] 抗體非特異性結合BSA
時間Tue Nov 12 00:14:56 2013
我最近在做Nox1 68Kd
都是用sigma 或是genetex抗體在偵測
但是有一次跑了一個實驗，用這支抗體去偵測 20ng, 200ng以及2000ng的BSA
結果居然出現約65-70kd band在200ng以及2000ng的樣品上
版上的大大有沒有什麼好建議，排除我之前做得結果都是BSA的可能性？
謝謝
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 158.93.6.11
1F：→ blence:沒有提到先前樣品來源,含量,偵測方法,及如何偵測BSA的ctrl 11/12 00:54
2F：推 joseph103331:就...把BSA跟你的先前樣品一起loading看大小囉 11/12 02:31
3F：→ joseph103331:然後...樣品來源很重要就是了 11/12 02:32
4F：→ joseph103331:之前的樣品沒有BSA 那怎麼樣也不可能是BSA囉 11/12 02:34
樣品就是細胞，養在含5%FBS的ebm-2培養基裡，再取細胞的時候，
就是直接把培養基抽掉，加入Lysis buffer。然後取Lysate直接跑膠。
BSA 則是溶在水裡後直接加loading buffer，然後跑膠。
因為之前是把BSA加入培養基去刺激Nox1表達，所以老闆覺得有沒有
可能之前偵測到的Nox1都不是真的，都是BSA......然後就直接用BSA
跑膠看看，沒想到還真的偵測到Band。
現在就是直接用老的lysate跟200ng的BSA一起跑，然後用
兩個抗體做看看，也許就只是non-specific binding而已，
只是讓大家很意外，怎麼會BSA也會被Nox1抗體偵測到，兩
個Protein幾乎是不相同的Protein耶，真不知道怎麼解釋......
※ 編輯: brigand 來自: 158.93.6.11 (11/12 04:01)
5F：→ blence:如果細節都不提反倒很好解釋,可是瞎子摸象的答案很沒意義 11/12 04:43
6F：→ blence:像BSA-Ag for pAb,可是留著這種答案,心情不會比較好 11/12 04:59
7F：→ puec2:會不會是BSA量太大造成的non-specific binding? 11/12 12:52
8F：→ puec2:有些抗體連maker都會被壓出來 11/12 12:53
9F：推 icome:BSA超愛亂黏 很正常 11/13 00:09