作者brigand (台湾加油)
看板Biotech
标题[求救] 抗体非特异性结合BSA
时间Tue Nov 12 00:14:56 2013
我最近在做Nox1 68Kd
都是用sigma 或是genetex抗体在侦测
但是有一次跑了一个实验，用这支抗体去侦测 20ng, 200ng以及2000ng的BSA
结果居然出现约65-70kd band在200ng以及2000ng的样品上
版上的大大有没有什麽好建议，排除我之前做得结果都是BSA的可能性？
谢谢
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 158.93.6.11
1F：→ blence:没有提到先前样品来源,含量,侦测方法,及如何侦测BSA的ctrl 11/12 00:54
2F：推 joseph103331:就...把BSA跟你的先前样品一起loading看大小罗 11/12 02:31
3F：→ joseph103331:然後...样品来源很重要就是了 11/12 02:32
4F：→ joseph103331:之前的样品没有BSA 那怎麽样也不可能是BSA罗 11/12 02:34
样品就是细胞，养在含5%FBS的ebm-2培养基里，再取细胞的时候，
就是直接把培养基抽掉，加入Lysis buffer。然後取Lysate直接跑胶。
BSA 则是溶在水里後直接加loading buffer，然後跑胶。
因为之前是把BSA加入培养基去刺激Nox1表达，所以老板觉得有没有
可能之前侦测到的Nox1都不是真的，都是BSA......然後就直接用BSA
跑胶看看，没想到还真的侦测到Band。
现在就是直接用老的lysate跟200ng的BSA一起跑，然後用
两个抗体做看看，也许就只是non-specific binding而已，
只是让大家很意外，怎麽会BSA也会被Nox1抗体侦测到，两
个Protein几乎是不相同的Protein耶，真不知道怎麽解释......
※ 编辑: brigand 来自: 158.93.6.11 (11/12 04:01)
5F：→ blence:如果细节都不提反倒很好解释,可是瞎子摸象的答案很没意义 11/12 04:43
6F：→ blence:像BSA-Ag for pAb,可是留着这种答案,心情不会比较好 11/12 04:59
7F：→ puec2:会不会是BSA量太大造成的non-specific binding? 11/12 12:52
8F：→ puec2:有些抗体连maker都会被压出来 11/12 12:53
9F：推 icome:BSA超爱乱黏 很正常 11/13 00:09