作者EDONIS (ED)
看板Biotech
標題[求救] SDS-PAGE 跑膠圖求助
時間Tue Oct 29 02:47:23 2013
請問我2小時跑出來的電泳膠，怎麼好像跑不動!!
跑了好幾片都長這樣!!@@
設定100V
http://ppt.cc/XvXl
是哪邊出了問題，有人知道嗎??求解ORZ
補上running buffer配方 10X electrophoresis running buffer:
In a final volume of 500mL of ddH2O, dissolve 15g of Tris-base, 72g of
glycine and 5g of SDS
先配10倍的，使用前稀釋成1倍!!
有蓋到WELL以上，沒有漏!!我看機器顯示是100V我設定也是100V
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 123.195.15.103
1F：推 HEK293:設定100V跟是否到達100V是兩回事，你是哪一個？ 10/29 09:00
2F：→ milkpa:buffer對不對，有沒有蓋到well以上（有沒有漏） 10/29 10:09
3F：推 babylikeg:你的running buffer 有check嗎? 是自己配的嗎? 10/29 10:09
4F：→ raiyu:buffer漏了? 10/29 10:24
5F：→ Ianthegood:有stacking gel嗎 10/29 10:47
6F：推 tsubasawolfy:他已經把stack剷掉了吧 上次有這情況搞半天結果是 10/29 11:06
7F：→ tsubasawolfy:蓋子上的銅接頭生鏽嚴重 能通過的電剩一點點 10/29 11:07
8F：→ tsubasawolfy:如果buffer都沒問題 也沒漏buffer 就檢查PSU,接頭, 10/29 11:07
9F：→ tsubasawolfy:還有那條貴森森鉑金線 10/29 11:08
※ 編輯: EDONIS 來自: 123.195.15.103 (10/29 16:19)
10F：→ storm780121:tris才15g? 10/29 17:23
11F：→ blence:Tris是正常的,但你不該調pH,如果覺得跟往常有不尋常的發熱 10/29 21:19
12F：→ EDONIS:我沒有調PH值!!我直接用了!! 10/29 22:33
※ 編輯: EDONIS 來自: 123.195.15.103 (10/29 22:33)
13F：推 leoblack:是biorad就是是看~把內外buf都灌到一樣高跑跑看 10/30 00:43
14F：→ blence:很反對上面做法，錯誤的情況不該也不可再用錯誤方法解決 10/30 00:48
15F：→ Invec:buffer加到一樣高根本沒有幫助 10/30 03:18
16F：推 fall199721:看這張圖的感覺很像是全部卡在Stacking gel 無法過去 10/31 03:04
17F：→ fall199721:separating gel 那邊, 當初配SDS-PAGE的buffer PH值要 10/31 03:06
18F：→ fall199721:不要再確認一下 ? 10/31 03:07
19F：→ fall199721:還有就是 當初sample dye裡面有加beta-Me或者DTT嗎? 10/31 03:08
20F：推 genep:我猜也是separating有問題 沒配錯的話check一下pH值. 10/31 04:14
21F：→ puec2:可能是白金絲斷了 10/31 14:50
22F：→ htLiu:下膠PH錯了 10/31 23:23
23F：→ EDONIS:下層除了1.5M Tris-HCl (pH8.8)其他都沒調PH值!! 11/01 02:01
24F：→ EDONIS:下層膠的配方我發文問過@@~~也曾懷疑過又重新查配方試了 11/01 02:03
25F：→ EDONIS:跑出來也這樣!!@@sample dye我買配好的!!裡面都加了!! 11/01 02:03
26F：→ EDONIS:板大有成功過的配方可以來信我在重新做一次確認下嗎?? 11/01 02:04
27F：→ blence:你是不是在重配Tris-HCl pH8.8或6.8之後就這樣了？ 11/01 02:34
28F：→ blence:以及你好像沒有回應你的sample到底在stacking或separating? 11/01 02:36
29F：→ EDONIS:應該是跑過了stacking然後separating這裡好像卡住!! 11/01 16:20
30F：→ fall199721:通常上下膠的PH值我都是調final的PH值 不會只調Tris的 11/01 23:43
31F：→ fall199721:部分 以這張跑膠塗看起來比較像是Seperating gel那邊 11/01 23:44
32F：→ fall199721:出了問題 最有可能就是你下膠沒配好(我以前也發生過類 11/01 23:45
33F：→ fall199721:似這張圖的情況 再不然還有一點就是 你蛋白萃取的時候 11/01 23:46
34F：→ fall199721:沒有處理好可能還留下大片段的DNA SAMPLE DYE裡面是否 11/01 23:47
35F：→ fall199721:有還原劑也會影響Protein denature程度 但以你這張圖來 11/01 23:47
36F：→ fall199721:看 感覺比較像是你膠沒做好 下次配再15ML/50ML tube裡 11/01 23:48
37F：→ fall199721:請記得要混和均勻 不然會影響他跑膠得過程 11/01 23:49
38F：→ fall199721:以上是一些意見 僅供E大參考囉^^ 11/01 23:49
39F：→ jsi:電源供應器是否誤設時間? 11/02 01:00
40F：→ puec2:對了 電源顯示100V 那電流呢? 11/02 18:23
41F：→ vandia:你的膠是做幾%的？？ 11/04 13:47
42F：推 NFkappaB:buffer有過白金絲嗎? 11/06 02:06
43F：→ EDONIS:有過白金絲，是12%的膠!!我2小時時間到去停的!! 11/09 20:46