作者EDONIS (ED)
看板Biotech
标题[求救] SDS-PAGE 跑胶图求助
时间Tue Oct 29 02:47:23 2013
请问我2小时跑出来的电泳胶，怎麽好像跑不动!!
跑了好几片都长这样!!@@
设定100V
http://ppt.cc/XvXl
是哪边出了问题，有人知道吗??求解ORZ
补上running buffer配方 10X electrophoresis running buffer:
In a final volume of 500mL of ddH2O, dissolve 15g of Tris-base, 72g of
glycine and 5g of SDS
先配10倍的，使用前稀释成1倍!!
有盖到WELL以上，没有漏!!我看机器显示是100V我设定也是100V
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 123.195.15.103
1F：推 HEK293:设定100V跟是否到达100V是两回事，你是哪一个？ 10/29 09:00
2F：→ milkpa:buffer对不对，有没有盖到well以上（有没有漏） 10/29 10:09
3F：推 babylikeg:你的running buffer 有check吗? 是自己配的吗? 10/29 10:09
4F：→ raiyu:buffer漏了? 10/29 10:24
5F：→ Ianthegood:有stacking gel吗 10/29 10:47
6F：推 tsubasawolfy:他已经把stack铲掉了吧 上次有这情况搞半天结果是 10/29 11:06
7F：→ tsubasawolfy:盖子上的铜接头生锈严重 能通过的电剩一点点 10/29 11:07
8F：→ tsubasawolfy:如果buffer都没问题 也没漏buffer 就检查PSU,接头, 10/29 11:07
9F：→ tsubasawolfy:还有那条贵森森铂金线 10/29 11:08
※ 编辑: EDONIS 来自: 123.195.15.103 (10/29 16:19)
10F：→ storm780121:tris才15g? 10/29 17:23
11F：→ blence:Tris是正常的,但你不该调pH,如果觉得跟往常有不寻常的发热 10/29 21:19
12F：→ EDONIS:我没有调PH值!!我直接用了!! 10/29 22:33
※ 编辑: EDONIS 来自: 123.195.15.103 (10/29 22:33)
13F：推 leoblack:是biorad就是是看~把内外buf都灌到一样高跑跑看 10/30 00:43
14F：→ blence:很反对上面做法，错误的情况不该也不可再用错误方法解决 10/30 00:48
15F：→ Invec:buffer加到一样高根本没有帮助 10/30 03:18
16F：推 fall199721:看这张图的感觉很像是全部卡在Stacking gel 无法过去 10/31 03:04
17F：→ fall199721:separating gel 那边, 当初配SDS-PAGE的buffer PH值要 10/31 03:06
18F：→ fall199721:不要再确认一下 ? 10/31 03:07
19F：→ fall199721:还有就是 当初sample dye里面有加beta-Me或者DTT吗? 10/31 03:08
20F：推 genep:我猜也是separating有问题 没配错的话check一下pH值. 10/31 04:14
21F：→ puec2:可能是白金丝断了 10/31 14:50
22F：→ htLiu:下胶PH错了 10/31 23:23
23F：→ EDONIS:下层除了1.5M Tris-HCl (pH8.8)其他都没调PH值!! 11/01 02:01
24F：→ EDONIS:下层胶的配方我发文问过@@~~也曾怀疑过又重新查配方试了 11/01 02:03
25F：→ EDONIS:跑出来也这样!!@@sample dye我买配好的!!里面都加了!! 11/01 02:03
26F：→ EDONIS:板大有成功过的配方可以来信我在重新做一次确认下吗?? 11/01 02:04
27F：→ blence:你是不是在重配Tris-HCl pH8.8或6.8之後就这样了？ 11/01 02:34
28F：→ blence:以及你好像没有回应你的sample到底在stacking或separating? 11/01 02:36
29F：→ EDONIS:应该是跑过了stacking然後separating这里好像卡住!! 11/01 16:20
30F：→ fall199721:通常上下胶的PH值我都是调final的PH值 不会只调Tris的 11/01 23:43
31F：→ fall199721:部分 以这张跑胶涂看起来比较像是Seperating gel那边 11/01 23:44
32F：→ fall199721:出了问题 最有可能就是你下胶没配好(我以前也发生过类 11/01 23:45
33F：→ fall199721:似这张图的情况 再不然还有一点就是 你蛋白萃取的时候 11/01 23:46
34F：→ fall199721:没有处理好可能还留下大片段的DNA SAMPLE DYE里面是否 11/01 23:47
35F：→ fall199721:有还原剂也会影响Protein denature程度 但以你这张图来 11/01 23:47
36F：→ fall199721:看 感觉比较像是你胶没做好 下次配再15ML/50ML tube里 11/01 23:48
37F：→ fall199721:请记得要混和均匀 不然会影响他跑胶得过程 11/01 23:49
38F：→ fall199721:以上是一些意见 仅供E大参考罗^^ 11/01 23:49
39F：→ jsi:电源供应器是否误设时间? 11/02 01:00
40F：→ puec2:对了 电源显示100V 那电流呢? 11/02 18:23
41F：→ vandia:你的胶是做几%的？？ 11/04 13:47
42F：推 NFkappaB:buffer有过白金丝吗? 11/06 02:06
43F：→ EDONIS:有过白金丝，是12%的胶!!我2小时时间到去停的!! 11/09 20:46