作者bjuh (。)
看板Biotech
標題[求救] Raw264.7汙染
時間Mon Oct 28 16:52:21 2013
各位先進大家好
目前我的實驗用到的細胞是Raw264.7這株
前一陣子養的時候都好好的沒有汙染
上星期開始養的細胞每一盤都汙染(大概6,7盤flask)
凍管復活之後培養8小時貼盤後換掉含有DMSO的medium <此步驟綠綠蟲還沒出現
換完medium之後培養大約12小時綠綠蟲就出來了!!!
它們可以被PBS洗掉 但是效果還是有限。
這是顯微鏡下看到的是綠綠蟲 而且游得滿快的
http://imgur.com/DzyTsoR 200x
http://imgur.com/LA74hgJ 400x
操作台大清潔、換medium、培養箱換抑黴劑都還是一樣會汙染
想請問大家有遇過這種情況嗎?
後來是怎麼解決的呢?
好煩惱阿綠綠的蟲浪費了我一個星期的時間阿~~~~
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.120.104.143
1F：推 d200190:綠綠蟲?你是說背景小黑點還是大隻的?大隻的是Macrophage活 10/28 18:16
2F：→ d200190:化變形喔@@" 10/28 18:16
3F：推 TW185930:會不會是凍管早就污染了??? 之前我們lab沒保好，就會這樣 10/28 18:33
4F：→ bjuh:凍管沒問題 我之前作凍管復活都是OK的 10/28 18:50
5F：→ bjuh:回一樓 我知道大顆的是細胞啦= = 綠綠蟲指的是小小小顆的 10/28 18:50
6F：推 qiet:pipette man, tip, PBS等都換過新的? 同個incubator只有你的 10/28 20:49
7F：→ qiet:RAW有問題? 同一批凍管之前用都OK? 是否有在使用抗生素? 10/28 20:50
8F：→ bjuh:PBS換新的 pipette man, tip都是新的 同個培養箱只有我的有 10/28 21:17
9F：→ bjuh:汙染，同批凍管之前都OK而且都是我作的 培養箱另外幾盤也都是 10/28 21:18
10F：→ bjuh:我的凍管 我們家MEDIUM沒有用抗生素 我在想是不是我的MEDIUM 10/28 21:18
11F：→ bjuh:有問題..... 10/28 21:18
12F：推 chench0710:把各種有可能的東西拿去培養看看... 10/28 23:24
13F：推 qiet:medium是買粉末自己配的嗎? 說不定你配的那一批都有問題, 10/29 01:08
14F：→ qiet:可以跟樓上說的將medium/PBS等拿去培養箱養看看. 10/29 01:09
15F：→ qiet:若有開/配新的medium也可以先try看看確定問題在哪... 10/29 01:09
16F：推 snowcyn32:也請朋友分盤給你 兩人都養同一批來源的細胞 看是不是 10/30 23:24
17F：→ snowcyn32:手法操作的問題 10/30 23:24
18F：→ bjuh:是買粉自己配的~沒有加PS，新配的跟舊的養出來都一樣有蟲蟲 10/30 23:36
19F：→ bjuh:另一個人配的養出來也是蟲蟲，拿不同人做的凍管養還是蟲蟲 10/30 23:37
20F：→ bjuh:medium每次配好我都有習慣直接裝一管在tube中同時放在培養箱 10/30 23:38
21F：→ bjuh:測試是否有汙染 新配的跟舊的medium都沒問題 清澈且鏡檢正常 10/30 23:39
22F：推 chench0710:這樣看起來感覺是有部分凍的細胞汙染囉@@ 10/31 18:30
23F：→ alicialai:FBS是同一批號嗎?曾經有過降的情形是因為FBS不同批號. 10/31 22:04