作者mitosi (mitosi)
看板Biotech
標題[求救] Southern blot 詭異的背景
時間Fri Oct 25 11:19:57 2013
最近剛開始接觸southern blot, 用的是thermoscientific的kit, biotin labeled probe,
但在最後都會發現membrane上有一半的background就是深色的，而且不管怎麼hybridize,
怎麼blocking，那個背景值只存在於整張membrane的1/2(即上部分，well 那裡開始)。
如圖
http://imgur.com/DOOEU5h
我很好奇到底是什麼原因造成partially background的產生
是因為transfer的時候所導致，還是?
感謝各位有經驗的大家分享寶貴的意見~~
不然我就沒有辦法繼續troubleshoot了!
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◆ From: 137.132.228.5
※ 編輯: mitosi 來自: 137.132.228.5 (10/25 11:24)
1F：→ chl20020933:I建議you寫Chinese就好好寫 片子明顯是呈色問題 10/26 01:50
2F：→ cutebetty:可能是membrane的問題 10/26 13:02
3F：→ mitosi:chl大謝謝你的寶貴意見 不過由於都是學術專有名詞所以我還 10/28 09:04
4F：→ mitosi:是傾向於用英文注寫 怕翻譯不好 所以請您多多包涵 10/28 09:06
5F：→ puec2:我是不知道為什麼會分兩半，但一般來說是因為你沒有把ECL 10/28 22:16
6F：→ puec2:滴乾淨就包起來去壓片，然後你的ECL可能很Sensitive，一些被 10/28 22:17
7F：→ puec2:洗下來游離的二抗就在你包起來的區域裡面游來游去。 10/28 22:17
8F：→ puec2:建議是把ECL滴乾淨一點。訊號有就是有，沒有就是沒有，不差 10/28 22:18
9F：→ puec2:那幾分鐘。 10/28 22:18
10F：→ puec2:但是我們以前用DIG壓出來的band其實都肥肥的，你可以考慮 10/28 22:19
11F：→ puec2:增加DNA loading的量，讓訊號增強，就可以減少壓片時間， 10/28 22:19
12F：→ puec2:還有你的DNA是不是很髒 還一堆卡在well上下不來？ 10/28 22:20
13F：→ mitosi:因為那個是total DNA所以會卡在上面，而且我的protocol裡沒 10/29 13:08
14F：→ mitosi:有說明要把peroxidase洗掉 所以呈色的時候就沒洗 10/29 13:09
15F：推 puec2:我跑total DNA 還是從植物組織抽的 也不會卡啊... 10/30 12:56
16F：→ puec2:可以試試看先純化出細胞核再抽DNA 多一天而已 10/30 12:57