作者mitosi (mitosi)
看板Biotech
标题[求救] Southern blot 诡异的背景
时间Fri Oct 25 11:19:57 2013
最近刚开始接触southern blot, 用的是thermoscientific的kit, biotin labeled probe,
但在最後都会发现membrane上有一半的background就是深色的，而且不管怎麽hybridize,
怎麽blocking，那个背景值只存在於整张membrane的1/2(即上部分，well 那里开始)。
如图
http://imgur.com/DOOEU5h
我很好奇到底是什麽原因造成partially background的产生
是因为transfer的时候所导致，还是?
感谢各位有经验的大家分享宝贵的意见~~
不然我就没有办法继续troubleshoot了!
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 137.132.228.5
※ 编辑: mitosi 来自: 137.132.228.5 (10/25 11:24)
1F：→ chl20020933:I建议you写Chinese就好好写 片子明显是呈色问题 10/26 01:50
2F：→ cutebetty:可能是membrane的问题 10/26 13:02
3F：→ mitosi:chl大谢谢你的宝贵意见 不过由於都是学术专有名词所以我还 10/28 09:04
4F：→ mitosi:是倾向於用英文注写 怕翻译不好 所以请您多多包涵 10/28 09:06
5F：→ puec2:我是不知道为什麽会分两半，但一般来说是因为你没有把ECL 10/28 22:16
6F：→ puec2:滴乾净就包起来去压片，然後你的ECL可能很Sensitive，一些被 10/28 22:17
7F：→ puec2:洗下来游离的二抗就在你包起来的区域里面游来游去。 10/28 22:17
8F：→ puec2:建议是把ECL滴乾净一点。讯号有就是有，没有就是没有，不差 10/28 22:18
9F：→ puec2:那几分钟。 10/28 22:18
10F：→ puec2:但是我们以前用DIG压出来的band其实都肥肥的，你可以考虑 10/28 22:19
11F：→ puec2:增加DNA loading的量，让讯号增强，就可以减少压片时间， 10/28 22:19
12F：→ puec2:还有你的DNA是不是很脏 还一堆卡在well上下不来？ 10/28 22:20
13F：→ mitosi:因为那个是total DNA所以会卡在上面，而且我的protocol里没 10/29 13:08
14F：→ mitosi:有说明要把peroxidase洗掉 所以呈色的时候就没洗 10/29 13:09
15F：推 puec2:我跑total DNA 还是从植物组织抽的 也不会卡啊... 10/30 12:56
16F：→ puec2:可以试试看先纯化出细胞核再抽DNA 多一天而已 10/30 12:57