作者UIOP7945 (~"~)
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標題[求救] 買來的蛋白質(CYP17A1)沒有heme...
時間Wed Oct 23 04:45:13 2013
各位好，小弟不才為化學系學生。之前跟生技廠定了一條重組蛋白想做ligand binding titration的實驗。該蛋白質是細胞色素P450 17A1 ,ligand會binding 在蛋白質中heme上，但是買來的蛋白質，實驗上一直測不到heme UV的訊號,追問廠商之後才知道他們在用大腸桿菌的表達時,沒有加ALA,所以合成蛋白質根本沒heme,……由於蛋白很貴不可能重買，該實驗又不得不做，因此想請問各位有可能用類似轉譯後修飾的方式加上heme嗎？例如加入過當量的heme至蛋白質中再離心純化…(目前文獻查到大多是在細胞階段導入)
不知到各位先見有什麽建議和想法呢？…真是十分苦惱啊QQ
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◆ From: 42.75.85.93
1F：→ blence:我對這個protein不熟,只知道一般蛋白如果從Ecoli純化後要還 10/23 05:23
2F：→ blence:原它的PTM不如砍掉重練比較快;你的方法若paper有試過或許ok 10/23 05:28
3F：→ milkpa:看有沒有辦法跟廠商減價購買，如果對方有疏失的話 10/23 08:23
4F：→ Ianthegood:先跟他盧看看阿 他們vector還有的話重做很容易 10/23 10:22