作者UIOP7945 (~"~)
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标题[求救] 买来的蛋白质(CYP17A1)没有heme...
时间Wed Oct 23 04:45:13 2013
各位好，小弟不才为化学系学生。之前跟生技厂定了一条重组蛋白想做ligand binding titration的实验。该蛋白质是细胞色素P450 17A1 ,ligand会binding 在蛋白质中heme上，但是买来的蛋白质，实验上一直测不到heme UV的讯号,追问厂商之後才知道他们在用大肠杆菌的表达时,没有加ALA,所以合成蛋白质根本没heme,……由於蛋白很贵不可能重买，该实验又不得不做，因此想请问各位有可能用类似转译後修饰的方式加上heme吗？例如加入过当量的heme至蛋白质中再离心纯化…(目前文献查到大多是在细胞阶段导入)
不知到各位先见有什麽建议和想法呢？…真是十分苦恼啊QQ
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◆ From: 42.75.85.93
1F：→ blence:我对这个protein不熟,只知道一般蛋白如果从Ecoli纯化後要还 10/23 05:23
2F：→ blence:原它的PTM不如砍掉重练比较快;你的方法若paper有试过或许ok 10/23 05:28
3F：→ milkpa:看有没有办法跟厂商减价购买，如果对方有疏失的话 10/23 08:23
4F：→ Ianthegood:先跟他卢看看阿 他们vector还有的话重做很容易 10/23 10:22