作者xxtomnyxx (翼天)
看板Biotech
標題[求救] 裂解細胞的方法
時間Mon Oct 21 14:44:24 2013
請問各位，
如果我現在要使用量測血糖的試劑，
來量測細胞內的糖分多寡，
我該用什麼方法去裂解細胞？
目前已經確定 SDS 會干擾測量葡萄糖的試劑，
以前有人試過用水來裂解，
但是裂解後的裂解液十分黏稠而難以操作(DNA與RNA含量太高？)
所以請問有哪些 Lysis buffer 是不含 detergent 的？
另外，
整個實驗設計基本上是培養 C2C12 細胞並使其分化，
然後使用不同種物質刺激，
測量這些物質在分化的 C2C12 細胞對 insulin 刺激
產生的葡萄糖吸收上有無影響。
使用的葡萄糖試劑是 Wako glucose kit。
這個 kit 一般用於測量葡萄糖吸收時，
主要是以量測用 KHH buffer 取代 medium 後，
KHH buffer 中的葡萄糖含量變化來推算葡萄糖吸收的能力，
但是我老闆是希望也能測量細胞內的葡萄糖變化來做較對。
版上的各位有什麼建議嗎？
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 115.80.0.187
1F：推 skyken10: Mini-Beadbeater，物理性裂解細胞方法！ 10/21 21:43
這個還需要儀器，可能沒辦法，但是還是謝謝你提供方法！
補充一下，
如果用水或物理性方法裂解，
細胞核應該也會破吧？
目前是希望能在細胞裂解之後能用離心去掉細胞核與核內的核酸，
有沒有什麼比較可行的方法呢？
※ 編輯: xxtomnyxx 來自: 101.8.196.39 (10/22 13:24)
2F：推 tsubasawolfy:google"hypotonic buffer" 10/22 13:54
3F：→ tsubasawolfy:加完後高速離心下就可以壓破細胞 剩下那些渣渣就是 10/22 13:59
4F：→ tsubasawolfy:細胞核 核膜沒那麼容易破 10/22 14:02
喔喔！非常感謝你！
這個 lysis buffer 很值得試試看！
查了一下發現配方有好多種 XD
就先用手邊有的材料能配的出來的試試吧！
感謝 skyken10 與 tsubasawolfy！
※ 編輯: xxtomnyxx 來自: 101.15.7.248 (10/22 20:35)