作者xxtomnyxx (翼天)
看板Biotech
标题[求救] 裂解细胞的方法
时间Mon Oct 21 14:44:24 2013
请问各位，
如果我现在要使用量测血糖的试剂，
来量测细胞内的糖分多寡，
我该用什麽方法去裂解细胞？
目前已经确定 SDS 会干扰测量葡萄糖的试剂，
以前有人试过用水来裂解，
但是裂解後的裂解液十分黏稠而难以操作(DNA与RNA含量太高？)
所以请问有哪些 Lysis buffer 是不含 detergent 的？
另外，
整个实验设计基本上是培养 C2C12 细胞并使其分化，
然後使用不同种物质刺激，
测量这些物质在分化的 C2C12 细胞对 insulin 刺激
产生的葡萄糖吸收上有无影响。
使用的葡萄糖试剂是 Wako glucose kit。
这个 kit 一般用於测量葡萄糖吸收时，
主要是以量测用 KHH buffer 取代 medium 後，
KHH buffer 中的葡萄糖含量变化来推算葡萄糖吸收的能力，
但是我老板是希望也能测量细胞内的葡萄糖变化来做较对。
版上的各位有什麽建议吗？
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 115.80.0.187
1F：推 skyken10: Mini-Beadbeater，物理性裂解细胞方法！ 10/21 21:43
这个还需要仪器，可能没办法，但是还是谢谢你提供方法！
补充一下，
如果用水或物理性方法裂解，
细胞核应该也会破吧？
目前是希望能在细胞裂解之後能用离心去掉细胞核与核内的核酸，
有没有什麽比较可行的方法呢？
※ 编辑: xxtomnyxx 来自: 101.8.196.39 (10/22 13:24)
2F：推 tsubasawolfy:google"hypotonic buffer" 10/22 13:54
3F：→ tsubasawolfy:加完後高速离心下就可以压破细胞 剩下那些渣渣就是 10/22 13:59
4F：→ tsubasawolfy:细胞核 核膜没那麽容易破 10/22 14:02
喔喔！非常感谢你！
这个 lysis buffer 很值得试试看！
查了一下发现配方有好多种 XD
就先用手边有的材料能配的出来的试试吧！
感谢 skyken10 与 tsubasawolfy！
※ 编辑: xxtomnyxx 来自: 101.15.7.248 (10/22 20:35)