大家好 詳細圖檔於下列網址內 http://ppt.cc/N7Cy (如果PCMAN開不了換至Google chrome應該ok) 實際的實驗內容我在先前annexin V/7AAD的提問(15388篇)中有說明 今天做完的結果 感覺好像設定上還是沒抓到竅門 所以前來請有做過Annexin V/7AAD的高手指導一下 先簡單說明圖中各項組別 (A)未染色的活細胞Control (B)照射UV後4小時的細胞單染Annexin V (C)照射UV後4小時的細胞單染7-AAD (D)雙染Annexin V及7-AAD的活細胞Control 上述四組用於調整設定 (E)照射UV後4小時的細胞雙染Annexin V以及7-AAD (F)加入誘導凋亡藥物5nM兩小時後的細胞雙染Annexin V以及7-AAD (G)加入誘導凋亡藥物50nM兩小時後的細胞雙染Annexin V以及7-AAD 上述三組為實驗組 Flow上機後調整的方式為 1.先上未染色活細胞control(形成A圖) 目的:調整FSC/SSC以及FL2跟FL3至理想區域及象限 2.上照射UV後4小時的細胞單染Annexin V 目的:調整FL3-FL2 compensation 3.上照射UV後4小時的細胞單染7-AAD 目的:調整FL2-FL3 compensation compensation最終設定大約值是 FL3-FL2=14% FL2-FL3=28% 4.上雙染Annexin V及7-AAD的活細胞Control 目的:確認十字範圍設定baseline 5.完成設定後依序上後續實驗組 跑完後對data的疑問 1.照射UV的細胞感覺好像沒甚麼死= = 在跑UV單染的圖出來時 當下的反應是 X!(消音)不會沒染上吧? 但後來看到藥物組的圖形有出來 感覺應該是有染上 反而更疑惑UV組到底出甚麼問題 2.UV部分的Data感覺細胞群好難抓 所以先沒有gate 不知道這邊的細胞能Gate哪一塊區域? 3.實驗的組別設計上 不知道大家看完有沒有覺得哪邊有問題? 會不會是實驗組別設計上(特別是調整設定哪幾管)的問題 才會導致圖形變這樣 4.一般來說染色的時間大家大概最長到多少? 我從下Annexin V/7AAD到上機是15分鐘 目前這組DATA唯一給我的好消息是 如果他是OK的 那藥物組(G)可能就是我要的條件 但那也要DATA是OK的 T皿T 而且看到UV組的圖是那樣好像都還活得好好的感覺 冏 希望大家能對我設定上以及實驗組別設計的部分給我建議 因為這細胞凋亡條件對我來說很重要 懇請大家幫忙 先跟大家說聲謝謝 --

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