大家好 详细图档於下列网址内 http://ppt.cc/N7Cy (如果PCMAN开不了换至Google chrome应该ok) 实际的实验内容我在先前annexin V/7AAD的提问(15388篇)中有说明 今天做完的结果 感觉好像设定上还是没抓到窍门 所以前来请有做过Annexin V/7AAD的高手指导一下 先简单说明图中各项组别 (A)未染色的活细胞Control (B)照射UV後4小时的细胞单染Annexin V (C)照射UV後4小时的细胞单染7-AAD (D)双染Annexin V及7-AAD的活细胞Control 上述四组用於调整设定 (E)照射UV後4小时的细胞双染Annexin V以及7-AAD (F)加入诱导凋亡药物5nM两小时後的细胞双染Annexin V以及7-AAD (G)加入诱导凋亡药物50nM两小时後的细胞双染Annexin V以及7-AAD 上述三组为实验组 Flow上机後调整的方式为 1.先上未染色活细胞control(形成A图) 目的:调整FSC/SSC以及FL2跟FL3至理想区域及象限 2.上照射UV後4小时的细胞单染Annexin V 目的:调整FL3-FL2 compensation 3.上照射UV後4小时的细胞单染7-AAD 目的:调整FL2-FL3 compensation compensation最终设定大约值是 FL3-FL2=14% FL2-FL3=28% 4.上双染Annexin V及7-AAD的活细胞Control 目的:确认十字范围设定baseline 5.完成设定後依序上後续实验组 跑完後对data的疑问 1.照射UV的细胞感觉好像没甚麽死= = 在跑UV单染的图出来时 当下的反应是 X!(消音)不会没染上吧? 但後来看到药物组的图形有出来 感觉应该是有染上 反而更疑惑UV组到底出甚麽问题 2.UV部分的Data感觉细胞群好难抓 所以先没有gate 不知道这边的细胞能Gate哪一块区域? 3.实验的组别设计上 不知道大家看完有没有觉得哪边有问题? 会不会是实验组别设计上(特别是调整设定哪几管)的问题 才会导致图形变这样 4.一般来说染色的时间大家大概最长到多少? 我从下Annexin V/7AAD到上机是15分钟 目前这组DATA唯一给我的好消息是 如果他是OK的 那药物组(G)可能就是我要的条件 但那也要DATA是OK的 T皿T 而且看到UV组的图是那样好像都还活得好好的感觉 冏 希望大家能对我设定上以及实验组别设计的部分给我建议 因为这细胞凋亡条件对我来说很重要 恳请大家帮忙 先跟大家说声谢谢 --

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