大家好~ 在此先感謝上次在我發問提供建議的大大~ 也特別感謝 GOSHR 大大~幫了我很大的忙!!! 現在切片的結果很順利~ 之後太忙碌了~應該親口和您道謝才是! 感謝再感謝~ --------------- 這次也有問題想要問一下有經驗者~ 我現在實驗用的model是 medaka (青 魚將 魚) (類似zebrafish小型魚) 現在用 Acridine orange (AO) 染色 來觀察細胞凋亡的狀況 關於AO我查到的原理是 --------- AO 是一種螢光色素，其檢測激發濾光片波長488nm,阻斷濾光片波長515nm。 它與細胞中DNA和RNA結合量存在差別，可發出不同顏色的螢光， 與DNA結合量少發綠色螢光，與RNA結合量多發桔黃色或桔紅色螢光。 在螢光顯微鏡下觀察，AO可透過正常細胞膜，使細胞核呈綠色或黃綠色均勻螢光； 而在凋亡細胞中，因染色質固縮或斷裂為大小不等的片斷，形成凋亡小體。 AO使其染上緻密濃染的黃綠色螢光，或黃綠色碎片顆粒； 而壞死細胞黃螢光減弱甚至消失 有其他我沒有查到的資訊嗎? --------- 我參考其中一篇PAPER (Developmental toxicity of cypermethrin in embryo-larval stages of zebrah) 我是用正常孵化的幼魚來染 我疑惑的是 為什麼正常和經暴露的魚，經AO染色後，腹腔都會看到螢光 我染後拍出來的照片~結果該如何解釋 (都可以看到螢光...不可能都細胞凋亡吧?! --------以下附上實驗和圖片--------- 我的溶液及方法是 Reagents ● 5 μg/ml acridine orange (AO) solution ( 5 mg/ml AO stock solution) ● medaka ringer solution (embryo solution) Method 一、 medaka直接放入AO solution 1. Larva fish are incubated in AO solution for 60 min in the dark. 2. Wash three times with medaka ringer solution. 3. Signals are detected using the green (FITC) filter set with a fluorescence microscope. 圖片： http://photo.xuite.net/dearetet/6985436 二、將(一)已經染色的medaka切片 1. 將medaka 用OCT包埋後，放入液態氮 30s後，再放入切片機內 1H 後切片(冷凍切片) 2. 切好的切片直接用螢光顯微鏡觀察 圖片： http://photo.xuite.net/dearetet/6965869 三、將medaka切片後再染AO (冷凍切片) 1. 將medaka 用OCT包埋後，放入液態氮 30s後，再放入切片機內 1H 後切片 2. 切好的切片，將AO solution 滴在玻片上 培養 30min in the dark. 3. 用 embryo solution 洗三次 4. 螢光顯微鏡拍照 圖片：http://photo.xuite.net/dearetet/6981921 ---------------- 煩請大家替我解解惑，謝謝大家! --

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