大家好~ 在此先感谢上次在我发问提供建议的大大~ 也特别感谢 GOSHR 大大~帮了我很大的忙!!! 现在切片的结果很顺利~ 之後太忙碌了~应该亲口和您道谢才是! 感谢再感谢~ --------------- 这次也有问题想要问一下有经验者~ 我现在实验用的model是 medaka (青 鱼将 鱼) (类似zebrafish小型鱼) 现在用 Acridine orange (AO) 染色 来观察细胞凋亡的状况 关於AO我查到的原理是 --------- AO 是一种萤光色素，其检测激发滤光片波长488nm,阻断滤光片波长515nm。 它与细胞中DNA和RNA结合量存在差别，可发出不同颜色的萤光， 与DNA结合量少发绿色萤光，与RNA结合量多发桔黄色或桔红色萤光。 在萤光显微镜下观察，AO可透过正常细胞膜，使细胞核呈绿色或黄绿色均匀萤光； 而在凋亡细胞中，因染色质固缩或断裂为大小不等的片断，形成凋亡小体。 AO使其染上致密浓染的黄绿色萤光，或黄绿色碎片颗粒； 而坏死细胞黄萤光减弱甚至消失 有其他我没有查到的资讯吗? --------- 我参考其中一篇PAPER (Developmental toxicity of cypermethrin in embryo-larval stages of zebrah) 我是用正常孵化的幼鱼来染 我疑惑的是 为什麽正常和经暴露的鱼，经AO染色後，腹腔都会看到萤光 我染後拍出来的照片~结果该如何解释 (都可以看到萤光...不可能都细胞凋亡吧?! --------以下附上实验和图片--------- 我的溶液及方法是 Reagents ● 5 μg/ml acridine orange (AO) solution ( 5 mg/ml AO stock solution) ● medaka ringer solution (embryo solution) Method 一、 medaka直接放入AO solution 1. Larva fish are incubated in AO solution for 60 min in the dark. 2. Wash three times with medaka ringer solution. 3. Signals are detected using the green (FITC) filter set with a fluorescence microscope. 图片： http://photo.xuite.net/dearetet/6985436 二、将(一)已经染色的medaka切片 1. 将medaka 用OCT包埋後，放入液态氮 30s後，再放入切片机内 1H 後切片(冷冻切片) 2. 切好的切片直接用萤光显微镜观察 图片： http://photo.xuite.net/dearetet/6965869 三、将medaka切片後再染AO (冷冻切片) 1. 将medaka 用OCT包埋後，放入液态氮 30s後，再放入切片机内 1H 後切片 2. 切好的切片，将AO solution 滴在玻片上 培养 30min in the dark. 3. 用 embryo solution 洗三次 4. 萤光显微镜拍照 图片：http://photo.xuite.net/dearetet/6981921 ---------------- 烦请大家替我解解惑，谢谢大家! --

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