作者jas123654 (jack)
看板Biotech
標題[求救] Hif1 alpha看不到band
時間Tue Aug 27 00:16:52 2013
如標題
小弟目前要針對hif1 alphe做western
但是一直看不到band
只有加了CoCl2的positive control有強烈的band
control(什麼藥物都不加)
以及加藥組(加Fascaplysin)的完完全全沒有band
小弟實驗室在收lysate是先加PBS
收到沉澱物後才加lysus buffer(RIPA NaF PI Na3VO4)
爬了下舊文 似乎有人覺得應該先加lysis buffer
我覺得是不是用PBS刮細胞的時候我的Hif1就被degrade光光了
不知道有沒有高手能解惑的?
P.S. CoCL2作為positivve control有押出來漂亮的band
所以可以排除跑膠 transfer 抗體 ECL的問題
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 118.169.212.59
1F：推 leoblack:你確定你的treatment有起作用嘛!?HIF1α是inducible的 08/27 01:02
2F：→ leoblack:一般normal情況下本來就看不到HIF1α表現 08/27 01:02
3F：推 mesenchymal:針對你的本文,你也可以試著直接lysis buffer刮細胞 08/27 01:17
4F：→ mesenchymal:或是用trypsin to detach cells 08/27 01:19
5F：→ mesenchymal:另外一樓講的可能性也很高 08/27 01:22
6F：→ blence:postive control明明有看到,標題卻說沒看到 08/27 02:22
7F：→ blence:沒看到band很明顯不是收lysate的問題,而是你沒加CoCl2 08/27 02:28
小弟PTT首PO 已經補充一些資訊 請見諒
※ 編輯: jas123654 來自: 140.112.58.20 (08/27 08:00)
8F：推 hermannhesse:想請問是用哪一家的抗體呢? THX~ 08/27 10:03
一抗是BD的 編號610959 網路上好像蠻推這隻的
※ 編輯: jas123654 來自: 140.112.58.20 (08/27 10:21)