作者jas123654 (jack)
看板Biotech
标题[求救] Hif1 alpha看不到band
时间Tue Aug 27 00:16:52 2013
如标题
小弟目前要针对hif1 alphe做western
但是一直看不到band
只有加了CoCl2的positive control有强烈的band
control(什麽药物都不加)
以及加药组(加Fascaplysin)的完完全全没有band
小弟实验室在收lysate是先加PBS
收到沉淀物後才加lysus buffer(RIPA NaF PI Na3VO4)
爬了下旧文 似乎有人觉得应该先加lysis buffer
我觉得是不是用PBS刮细胞的时候我的Hif1就被degrade光光了
不知道有没有高手能解惑的?
P.S. CoCL2作为positivve control有押出来漂亮的band
所以可以排除跑胶 transfer 抗体 ECL的问题
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 118.169.212.59
1F：推 leoblack:你确定你的treatment有起作用嘛!?HIF1α是inducible的 08/27 01:02
2F：→ leoblack:一般normal情况下本来就看不到HIF1α表现 08/27 01:02
3F：推 mesenchymal:针对你的本文,你也可以试着直接lysis buffer刮细胞 08/27 01:17
4F：→ mesenchymal:或是用trypsin to detach cells 08/27 01:19
5F：→ mesenchymal:另外一楼讲的可能性也很高 08/27 01:22
6F：→ blence:postive control明明有看到,标题却说没看到 08/27 02:22
7F：→ blence:没看到band很明显不是收lysate的问题,而是你没加CoCl2 08/27 02:28
小弟PTT首PO 已经补充一些资讯 请见谅
※ 编辑: jas123654 来自: 140.112.58.20 (08/27 08:00)
8F：推 hermannhesse:想请问是用哪一家的抗体呢? THX~ 08/27 10:03
一抗是BD的 编号610959 网路上好像蛮推这只的
※ 编辑: jas123654 来自: 140.112.58.20 (08/27 10:21)