作者panyuyun (panyuyun)
看板Biotech
標題[方法] 抑菌圈實驗問題
時間Tue Aug 20 01:33:29 2013
想請問一下有做過抑菌圈實驗的前輩
我查到標準實驗的步驟是直接購買commercial的抗生素paper disk
自備sample的話可將sample浸泡在paper disk中
或將paper disk至於agar plate上，再滴上sample
我的問題有以下幾個：
1. 將細菌接踵至agar plate上，我查到兩種做法
一是取綿紗布浸泡在10^8 CFU/mL的菌液中，再分三次塗抹在agar plate
另一是取培養o/n的菌液100 uL至agar plate，以三角玻棒均勻塗抹
想請問兩種方法的效果?
沒用過綿紗布，操作三角玻棒比較熟悉
那我應該取多少濃度的100 uL菌液塗盤較恰當呢?
2. 之前做其他抑制圈實驗用過的paper disk是厚的
(一面有點像很紮實的棉花的質感，一面是像一般濾紙的質感)
但爬文發現有人說可以直接用一般濾紙用打洞機打就好
想請問兩者的差別?
3. 我的sample是非常黏稠的液體，呈現有點膠狀的狀態
感覺不太可能浸泡到完全吸收
如果要將sample滴在agar plate上的paper disk
體積建議多少?
或是有沒有人做這個實驗是可以直接滴10 uL在agar plate上的?
非常感謝大家耐心看完這篇落落長的問題文
也跪求有經驗的前輩幫忙解答了 <(_ _)> 謝謝~
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◆ From: 140.116.193.137
1F：推 Invec:1 我們是將菌液與降溫的agar混合後快速倒到plate裡 08/20 14:14
2F：→ Invec:2 是用電泳用的濾紙直接以打洞機打洞 接著用鎳子把 paper 08/20 14:15
3F：→ Invec:disk放到已冷卻(並吹乾)的 plate中間 最後滴上 10uL待測物 08/20 14:16
4F：→ Invec:倒置培養 (吹乾和倒置都是避免plate表面的液體流來流去) 08/20 14:17
5F：→ Invec:液體非常黏稠可以考慮5uL 只要確定可以均勻散布在disc上即可 08/20 14:19
6F：→ panyuyun:好~ 謝謝您!! 我會再試試！ 08/20 15:41
7F：→ KittyGod:按CLSI標準應該是將菌液調整成0.5的McFarland值再塗抹 08/21 12:24
8F：→ KittyGod:然後用swab塗即可 08/21 12:27
9F：推 jerry761031:推樓上 10/07 05:30