作者panyuyun (panyuyun)
看板Biotech
标题[方法] 抑菌圈实验问题
时间Tue Aug 20 01:33:29 2013
想请问一下有做过抑菌圈实验的前辈
我查到标准实验的步骤是直接购买commercial的抗生素paper disk
自备sample的话可将sample浸泡在paper disk中
或将paper disk至於agar plate上，再滴上sample
我的问题有以下几个：
1. 将细菌接踵至agar plate上，我查到两种做法
一是取绵纱布浸泡在10^8 CFU/mL的菌液中，再分三次涂抹在agar plate
另一是取培养o/n的菌液100 uL至agar plate，以三角玻棒均匀涂抹
想请问两种方法的效果?
没用过绵纱布，操作三角玻棒比较熟悉
那我应该取多少浓度的100 uL菌液涂盘较恰当呢?
2. 之前做其他抑制圈实验用过的paper disk是厚的
(一面有点像很紮实的棉花的质感，一面是像一般滤纸的质感)
但爬文发现有人说可以直接用一般滤纸用打洞机打就好
想请问两者的差别?
3. 我的sample是非常黏稠的液体，呈现有点胶状的状态
感觉不太可能浸泡到完全吸收
如果要将sample滴在agar plate上的paper disk
体积建议多少?
或是有没有人做这个实验是可以直接滴10 uL在agar plate上的?
非常感谢大家耐心看完这篇落落长的问题文
也跪求有经验的前辈帮忙解答了 <(_ _)> 谢谢~
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.116.193.137
1F：推 Invec:1 我们是将菌液与降温的agar混合後快速倒到plate里 08/20 14:14
2F：→ Invec:2 是用电泳用的滤纸直接以打洞机打洞 接着用镍子把 paper 08/20 14:15
3F：→ Invec:disk放到已冷却(并吹乾)的 plate中间 最後滴上 10uL待测物 08/20 14:16
4F：→ Invec:倒置培养 (吹乾和倒置都是避免plate表面的液体流来流去) 08/20 14:17
5F：→ Invec:液体非常黏稠可以考虑5uL 只要确定可以均匀散布在disc上即可 08/20 14:19
6F：→ panyuyun:好~ 谢谢您!! 我会再试试！ 08/20 15:41
7F：→ KittyGod:按CLSI标准应该是将菌液调整成0.5的McFarland值再涂抹 08/21 12:24
8F：→ KittyGod:然後用swab涂即可 08/21 12:27
9F：推 jerry761031:推楼上 10/07 05:30