作者ab10169ab (神父)
看板Biotech
標題[求救] 細胞培養液呈混濁狀，要如何找出感染源??
時間Fri Aug 16 13:40:58 2013
從兩個多月前開始，我們實驗室就飽受細胞汙染困擾
受汙染情況如下：
1.培養液呈現混濁。
2.放大到最大倍率觀察，會看到十分密集的半透明小顆粒在蠕動。
3.Medium色澤偏橘黃。
4.雖然遭受汙染，但細胞還是正常貼附生長，但經過長時間還細胞還是會慢慢飄起來。
5.做Medium+FBS空白培養都不會有事，一旦放入細胞培養會在1到2天後遭受感染。
第一次發現感染時我們只用漂白水+酒精將培養箱內部擦拭過，但不久後還是繼續感染。
第二次清理我們將整間culture room清理過，培養箱整台擦拭過，水盤也換新的水進去
所有使用過的Medium跟PBS也都重新配置，但只撐一個多禮拜又發生感染。
第三次我們卯起來清，整間culture room清理之後，將培養箱內部層板完全拆除刷洗，
但因為滅菌釜太小放不進層板，所以只放到Laminar Hood照UV燈一整晚，就連培養箱內
的HEPA濾網都換新的，所有以前配製的的Medium跟PSB全部倒掉，完全重配，在爆發感
染後所冰凍的細胞株全部清除禁止使用。
前天我解凍一株細胞，隔天看細胞貼附狀況良好，培養液無混濁，照慣例剛解凍的細胞隔
天要換上乾淨的Medium以維持細胞健康生長。
可是今天早上去看，培養液又混濁了......
請問這到底是什麼樣的細菌所造成的汙染？
有任何的方式可以檢測出汙染源或是斷絕汙染嗎?要不然我覺得這在怎麼用力清掃都沒有
用，我想就連換新的培養箱還是無解決。
順帶一提，我們culture room也有其他實驗室共用，只是他們用的是另一台培養箱，但從
沒聽說他們有任何感染發生。
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.118.161.115
1F：→ xxtomnyxx:該不會是傳說中最惡毒的 mycoplasma.... 08/16 14:18
2F：推 leoblack:mycoplasma一般光學顯微鏡看不到= =" 08/16 15:21
3F：→ roy047:吸液槍有清過嗎? 08/16 15:32
4F：→ roy047:半透明是yeast嗎? 08/16 15:33
5F：→ puec2:incubator上鎖 08/16 16:15
6F：→ puec2:不然就是你的凍管有裂 你沒有注意到 解凍的時候髒水跑進去 08/16 16:18
7F：→ puec2:現在你想要跟人家借incubator人家應該也不會想藉給你們 08/16 16:21
8F：→ puec2: 借 08/16 16:21
9F：→ puec2:找不出原因的 cell culture汙染 十之八九是人為.... 08/16 16:22
10F：→ raiyu:去拜拜 08/16 18:35
11F：推 sinlu:waterbath 08/16 20:55
以前完全沒發生過這種情況，但自從爆發汙染後就一直壓不下來，因此培養細胞也變得也
一次比一次更小心，我本身已經是非常龜毛的人人了@@~尤其在做細胞實驗時，盡可能地
排除一切人為汙染的可能性。
剛剛我把受汙染的細胞以顯微鏡40x大小的倍率拍到以下畫面(請用1080p會比較清楚)：
https://www.youtube.com/watch?v=Ws9kYfNhP8U
從比例尺來看每隻菌的大小約為2~10微米呈且長條狀，稍早會說他是半透明顆粒狀實在是
因為裡面的菌多到拍無法對焦....
請問有人知道這是什麼菌類嗎??它的感染源可能來自哪邊??有什麼方法可以徹底斷絕污染
呢??跪求解答~~
※ 編輯: ab10169ab 來自: 140.118.234.195 (08/16 21:27)
※ 編輯: ab10169ab 來自: 140.118.234.195 (08/16 21:29)
12F：推 mesenchymal:看不太清楚,但你可以請別實驗室(確定沒污染的)分一盤 08/16 22:12
13F：→ mesenchymal:細胞給你,你直接放incubator 08/16 22:13
14F：→ mesenchymal:不過有點像桿菌就是了 08/16 22:15
15F：推 puec2:你的medium有沒有加抗生素？ 08/16 22:33
16F：推 tchan:細胞在凍之前就汙染了吧！要不要一次解三隻不同細胞看看？ 08/16 22:35
17F：→ tchan:或者拿三個不同時間凍的細胞來解看看，感覺汙染源並非由外 08/16 22:36
18F：→ tchan:而內，而是本來就存在於細胞的，所以你外面怎麼清都沒效 08/16 22:36
19F：→ tchan:若是你真的想要救，就P/S加到3%，然後每天換2~3次medium 08/16 22:37
20F：→ tchan:每次換medium時用PBS多洗幾次看看吧 08/16 22:38
21F：推 milkpa:看起來是細菌，跟別的實驗室借一盤確定沒有污染的細胞跟med 08/16 22:45
22F：→ milkpa:ium看是哪裡的問題 08/16 22:45
23F：推 ljii:放一盤純medium在incubator裡.看幾天後會感染.如果一直都 08/17 01:19
24F：→ ljii:沒感染那就是你凍的細胞有問題,或是管裂掉解涷過程感染 08/17 01:20
25F：推 conective:爆發感染後凍的細胞不用只是停損 真正的來源是之前凍的 08/18 11:08
26F：→ conective:細胞 1.解不同種細胞觀察 2.解不同時間點凍的細胞 08/18 11:09
27F：→ conective:直到找到沒問題的時間點或細胞株為止 08/18 11:09
28F：→ conective:細胞株若都陣亡就要重新買或要 若查出時間點就解之前的 08/18 11:10
29F：→ conective:重新養個幾代存起來保種 污染的都處理掉 08/18 11:10
30F：→ conective:看你的描述跟處置過程 不是培養箱或medium及FBS的問題 08/18 11:11
31F：推 spirithorse:建議換一罐PBS及trypsin!! 08/18 16:30
32F：推 hielin:清一下pipette 可能是裡面已經污染了 08/18 19:54
33F：→ ninetoweregg:這裡面的菌怎麼爬的神奇的快....... 08/19 21:29
34F：推 ararthur:建議一:laminar flow請人來校正清理(排除hood問題) 08/23 12:20
35F：→ ararthur:建議二:medium在配置好後再過濾一次 有時候serum品質... 08/23 12:20
36F：→ ararthur:建議三:裝個監視錄影機... 08/23 12:23
37F：→ ararthur:如果test純medium沒長不代表一定不是medium汙染哦 有時候 08/23 12:23
38F：→ ararthur:汙染源會需要細胞代謝才會爆發 我是覺得比較像hood掛點了 08/23 12:24
39F：→ Walkon:這細菌真的動得比我看過汙染的菌快很多XD 生命力旺盛 09/17 07:15