作者ab10169ab (神父)
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标题[求救] 细胞培养液呈混浊状，要如何找出感染源??
时间Fri Aug 16 13:40:58 2013
从两个多月前开始，我们实验室就饱受细胞污染困扰
受污染情况如下：
1.培养液呈现混浊。
2.放大到最大倍率观察，会看到十分密集的半透明小颗粒在蠕动。
3.Medium色泽偏橘黄。
4.虽然遭受污染，但细胞还是正常贴附生长，但经过长时间还细胞还是会慢慢飘起来。
5.做Medium+FBS空白培养都不会有事，一旦放入细胞培养会在1到2天後遭受感染。
第一次发现感染时我们只用漂白水+酒精将培养箱内部擦拭过，但不久後还是继续感染。
第二次清理我们将整间culture room清理过，培养箱整台擦拭过，水盘也换新的水进去
所有使用过的Medium跟PBS也都重新配置，但只撑一个多礼拜又发生感染。
第三次我们卯起来清，整间culture room清理之後，将培养箱内部层板完全拆除刷洗，
但因为灭菌釜太小放不进层板，所以只放到Laminar Hood照UV灯一整晚，就连培养箱内
的HEPA滤网都换新的，所有以前配制的的Medium跟PSB全部倒掉，完全重配，在爆发感
染後所冰冻的细胞株全部清除禁止使用。
前天我解冻一株细胞，隔天看细胞贴附状况良好，培养液无混浊，照惯例刚解冻的细胞隔
天要换上乾净的Medium以维持细胞健康生长。
可是今天早上去看，培养液又混浊了......
请问这到底是什麽样的细菌所造成的污染？
有任何的方式可以检测出污染源或是断绝污染吗?要不然我觉得这在怎麽用力清扫都没有
用，我想就连换新的培养箱还是无解决。
顺带一提，我们culture room也有其他实验室共用，只是他们用的是另一台培养箱，但从
没听说他们有任何感染发生。
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.118.161.115
1F：→ xxtomnyxx:该不会是传说中最恶毒的 mycoplasma.... 08/16 14:18
2F：推 leoblack:mycoplasma一般光学显微镜看不到= =" 08/16 15:21
3F：→ roy047:吸液枪有清过吗? 08/16 15:32
4F：→ roy047:半透明是yeast吗? 08/16 15:33
5F：→ puec2:incubator上锁 08/16 16:15
6F：→ puec2:不然就是你的冻管有裂 你没有注意到 解冻的时候脏水跑进去 08/16 16:18
7F：→ puec2:现在你想要跟人家借incubator人家应该也不会想藉给你们 08/16 16:21
8F：→ puec2: 借 08/16 16:21
9F：→ puec2:找不出原因的 cell culture污染 十之八九是人为.... 08/16 16:22
10F：→ raiyu:去拜拜 08/16 18:35
11F：推 sinlu:waterbath 08/16 20:55
以前完全没发生过这种情况，但自从爆发污染後就一直压不下来，因此培养细胞也变得也
一次比一次更小心，我本身已经是非常龟毛的人人了@@~尤其在做细胞实验时，尽可能地
排除一切人为污染的可能性。
刚刚我把受污染的细胞以显微镜40x大小的倍率拍到以下画面(请用1080p会比较清楚)：
https://www.youtube.com/watch?v=Ws9kYfNhP8U
从比例尺来看每只菌的大小约为2~10微米呈且长条状，稍早会说他是半透明颗粒状实在是
因为里面的菌多到拍无法对焦....
请问有人知道这是什麽菌类吗??它的感染源可能来自哪边??有什麽方法可以彻底断绝污染
呢??跪求解答~~
※ 编辑: ab10169ab 来自: 140.118.234.195 (08/16 21:27)
※ 编辑: ab10169ab 来自: 140.118.234.195 (08/16 21:29)
12F：推 mesenchymal:看不太清楚,但你可以请别实验室(确定没污染的)分一盘 08/16 22:12
13F：→ mesenchymal:细胞给你,你直接放incubator 08/16 22:13
14F：→ mesenchymal:不过有点像杆菌就是了 08/16 22:15
15F：推 puec2:你的medium有没有加抗生素？ 08/16 22:33
16F：推 tchan:细胞在冻之前就污染了吧！要不要一次解三只不同细胞看看？ 08/16 22:35
17F：→ tchan:或者拿三个不同时间冻的细胞来解看看，感觉污染源并非由外 08/16 22:36
18F：→ tchan:而内，而是本来就存在於细胞的，所以你外面怎麽清都没效 08/16 22:36
19F：→ tchan:若是你真的想要救，就P/S加到3%，然後每天换2~3次medium 08/16 22:37
20F：→ tchan:每次换medium时用PBS多洗几次看看吧 08/16 22:38
21F：推 milkpa:看起来是细菌，跟别的实验室借一盘确定没有污染的细胞跟med 08/16 22:45
22F：→ milkpa:ium看是哪里的问题 08/16 22:45
23F：推 ljii:放一盘纯medium在incubator里.看几天後会感染.如果一直都 08/17 01:19
24F：→ ljii:没感染那就是你冻的细胞有问题,或是管裂掉解涷过程感染 08/17 01:20
25F：推 conective:爆发感染後冻的细胞不用只是停损 真正的来源是之前冻的 08/18 11:08
26F：→ conective:细胞 1.解不同种细胞观察 2.解不同时间点冻的细胞 08/18 11:09
27F：→ conective:直到找到没问题的时间点或细胞株为止 08/18 11:09
28F：→ conective:细胞株若都阵亡就要重新买或要 若查出时间点就解之前的 08/18 11:10
29F：→ conective:重新养个几代存起来保种 污染的都处理掉 08/18 11:10
30F：→ conective:看你的描述跟处置过程 不是培养箱或medium及FBS的问题 08/18 11:11
31F：推 spirithorse:建议换一罐PBS及trypsin!! 08/18 16:30
32F：推 hielin:清一下pipette 可能是里面已经污染了 08/18 19:54
33F：→ ninetoweregg:这里面的菌怎麽爬的神奇的快....... 08/19 21:29
34F：推 ararthur:建议一:laminar flow请人来校正清理(排除hood问题) 08/23 12:20
35F：→ ararthur:建议二:medium在配置好後再过滤一次 有时候serum品质... 08/23 12:20
36F：→ ararthur:建议三:装个监视录影机... 08/23 12:23
37F：→ ararthur:如果test纯medium没长不代表一定不是medium污染哦 有时候 08/23 12:23
38F：→ ararthur:污染源会需要细胞代谢才会爆发 我是觉得比较像hood挂点了 08/23 12:24
39F：→ Walkon:这细菌真的动得比我看过污染的菌快很多XD 生命力旺盛 09/17 07:15