作者arile1989 (榕果)
看板Biotech
標題[求救] 細胞RAW264.7培養繼代問題
時間Tue Aug 13 01:45:08 2013
我想請問養過這株RAW264.7的細胞株嗎?
我目前正在做細胞的繼代
但是Passage2~3次後
隔天去看細胞幾乎都活化了
細胞來源:BCRC
培養基:90% GIBCO DMEM 的 Power with 4mM L-glutamine,
4500mg/L Glucose 另加1.5g Sodium bicarbonate
10% GIBCO 的 FBS
繼代方法: 1.滿盤時,吸除舊的medium,加入1ml新鮮medium至25T來刮細胞
2.吸取 1ml細胞溶液和9ml新鮮medium在15ml離心管均勻pipette
3.以1拆5去分盤
我的問題有以下4個
1.Passage2~3次後,隔天去看細胞幾乎全部都活化了
2.是否是繼代方法錯誤?還是中間步驟有需要改進的地方?
3.是否是medium中L-glutamine沒有再補充的原因?
(原本medium中L-glutamine的濃度是足夠的)
4.是否是FBS的品質不夠好,還是Medium要買Liquid的?
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 1.165.121.81
1F：推 utadalove:我們家也是用刮的,10cm plate 用6ml去刮!都沒什麼問題@@ 08/13 08:34
2F：→ utadalove:我們DMEM用powder配的,內容的成分跟你的差不多 08/13 08:36
3F：→ utadalove:25T用1ml去刮,medium可以cover住底部嗎?會有乾刮的情形? 08/13 08:38
4F：推 snowcyn32:滿盤多滿啊 太滿也會活化 8分滿應該就差不多了 08/13 09:31
5F：→ arile1989:n+1時確實有細胞過滿,且那時繼代時有乾刮的情況 08/13 13:44
6F：→ arile1989:之後有聽BCRC的建議,用75T和10ml的medium繼代 08/13 13:49
7F：→ arile1989:但是細胞還是都活化了@@ 08/13 13:50
8F：→ apa9394:不管是ATCC 還是其他單位的細胞 有再現性才是比較重要 08/13 13:55
9F：→ apa9394:來源已經都混亂不堪的情況下 要想的是怎樣和PAPER呈現一樣 08/13 13:56
10F：→ apa9394:或類似的結果 信心才會夠強 08/13 13:56
11F：→ apa9394:也有細胞在美國的實驗室 來台灣一直無法再現 08/13 13:57
12F：→ apa9394:光是實驗條件的掌控 就是很辛苦的部分 不過建議你 08/13 13:58
13F：→ apa9394:多跟幾個實驗室要 或許 會找到答案 08/13 13:58
14F：→ apa9394:無須花太多時間抓條件 很多時候是細胞本身的問題 08/13 13:59
15F：→ apa9394:要有效率的話 換細胞比較實際 08/13 14:00
16F：推 iyogirl:我用10cm dish 1/10比例去分 約兩天會五成滿 分盤 1/20可 08/13 22:23
17F：→ iyogirl:撐3天 5% FBS DMEM 五成大概會有1x10e7(兩天)三天會2x10e7 08/13 22:26
18F：→ iyogirl:如果有3成活化就可以放棄那一盤 我是用刮的繼代 08/13 22:28
19F：→ iyogirl:刮棒會用酒精消毒後reuse 08/13 22:28
20F：推 panyuyun:繼代RAW細胞我都直接用DMEM沖細胞，沒有用刮棒耶 08/14 00:39
21F：推 robin:請問一下 如何從細胞外觀判定RAW264.7細胞活化了呢? 08/14 01:58
22F：推 utadalove:會成星狀,很多觸角 08/14 08:20
23F：推 robin:謝謝U大回答 ^^ 08/14 09:19
24F：推 umijuki:換endotoxin-free或low endotoxin血清試試，但成本高很多 08/21 21:09
25F：→ umijuki:以前我也養這株，嬌貴的丫… 08/21 21:10
26F：推 hsnuyr:我們家是用BCS 比較沒有活化的問題 繼代用PIPETING的方式 08/22 16:03
27F：→ hsnuyr:打下來 有開始活化的話明顯會比較難打 08/22 16:03