作者arile1989 (榕果)
看板Biotech
标题[求救] 细胞RAW264.7培养继代问题
时间Tue Aug 13 01:45:08 2013
我想请问养过这株RAW264.7的细胞株吗?
我目前正在做细胞的继代
但是Passage2~3次後
隔天去看细胞几乎都活化了
细胞来源:BCRC
培养基:90% GIBCO DMEM 的 Power with 4mM L-glutamine,
4500mg/L Glucose 另加1.5g Sodium bicarbonate
10% GIBCO 的 FBS
继代方法: 1.满盘时,吸除旧的medium,加入1ml新鲜medium至25T来刮细胞
2.吸取 1ml细胞溶液和9ml新鲜medium在15ml离心管均匀pipette
3.以1拆5去分盘
我的问题有以下4个
1.Passage2~3次後,隔天去看细胞几乎全部都活化了
2.是否是继代方法错误?还是中间步骤有需要改进的地方?
3.是否是medium中L-glutamine没有再补充的原因?
(原本medium中L-glutamine的浓度是足够的)
4.是否是FBS的品质不够好,还是Medium要买Liquid的?
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◆ From: 1.165.121.81
1F：推 utadalove:我们家也是用刮的,10cm plate 用6ml去刮!都没什麽问题@@ 08/13 08:34
2F：→ utadalove:我们DMEM用powder配的,内容的成分跟你的差不多 08/13 08:36
3F：→ utadalove:25T用1ml去刮,medium可以cover住底部吗?会有乾刮的情形? 08/13 08:38
4F：推 snowcyn32:满盘多满啊 太满也会活化 8分满应该就差不多了 08/13 09:31
5F：→ arile1989:n+1时确实有细胞过满,且那时继代时有乾刮的情况 08/13 13:44
6F：→ arile1989:之後有听BCRC的建议,用75T和10ml的medium继代 08/13 13:49
7F：→ arile1989:但是细胞还是都活化了@@ 08/13 13:50
8F：→ apa9394:不管是ATCC 还是其他单位的细胞 有再现性才是比较重要 08/13 13:55
9F：→ apa9394:来源已经都混乱不堪的情况下 要想的是怎样和PAPER呈现一样 08/13 13:56
10F：→ apa9394:或类似的结果 信心才会够强 08/13 13:56
11F：→ apa9394:也有细胞在美国的实验室 来台湾一直无法再现 08/13 13:57
12F：→ apa9394:光是实验条件的掌控 就是很辛苦的部分 不过建议你 08/13 13:58
13F：→ apa9394:多跟几个实验室要 或许 会找到答案 08/13 13:58
14F：→ apa9394:无须花太多时间抓条件 很多时候是细胞本身的问题 08/13 13:59
15F：→ apa9394:要有效率的话 换细胞比较实际 08/13 14:00
16F：推 iyogirl:我用10cm dish 1/10比例去分 约两天会五成满 分盘 1/20可 08/13 22:23
17F：→ iyogirl:撑3天 5% FBS DMEM 五成大概会有1x10e7(两天)三天会2x10e7 08/13 22:26
18F：→ iyogirl:如果有3成活化就可以放弃那一盘 我是用刮的继代 08/13 22:28
19F：→ iyogirl:刮棒会用酒精消毒後reuse 08/13 22:28
20F：推 panyuyun:继代RAW细胞我都直接用DMEM冲细胞，没有用刮棒耶 08/14 00:39
21F：推 robin:请问一下 如何从细胞外观判定RAW264.7细胞活化了呢? 08/14 01:58
22F：推 utadalove:会成星状,很多触角 08/14 08:20
23F：推 robin:谢谢U大回答 ^^ 08/14 09:19
24F：推 umijuki:换endotoxin-free或low endotoxin血清试试，但成本高很多 08/21 21:09
25F：→ umijuki:以前我也养这株，娇贵的丫… 08/21 21:10
26F：推 hsnuyr:我们家是用BCS 比较没有活化的问题 继代用PIPETING的方式 08/22 16:03
27F：→ hsnuyr:打下来 有开始活化的话明显会比较难打 08/22 16:03