作者j31yo20 (j31yo20)
看板Biotech
標題[求救]yT&A vector問題
時間Mon Aug 12 11:57:27 2013
已經使用yT&A vector做實驗很久了，但是最近發現，接到yT&A vector後去定序，
發現要把forward定序完的那一條做reverse-complement才會跟reverse定序完、
原本的sequence符合(通常不是把reverse 那一條作reverse-complement)，這樣
讓我覺得在把sample做PCR完後，接到yT&A vector上有可能反接吧? 有沒有人
跟我發生一樣的情況，那只好重做clone嗎?
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 120.114.191.88
1F：→ puec2:你如果把TA cloning的原理再看仔細一點就會發現 08/12 14:26
2F：→ puec2:反接是很正常的事 08/12 14:26
3F：推 CD133:一樓正解，不過如果你當初在primer有設計restriction enzyme 08/12 17:24
4F：→ CD133:cutting sites，反接也就沒差，不影響你sub-cloning 08/12 17:25
5F：推 poison7202:您的TA還要再多做一點~看看原理吧!! 08/12 19:18
6F：→ j31yo20:這反接的機率有點高 transformation完 長出四顆，都是反接 08/12 20:01
7F：→ j31yo20:ok 謝謝大家嚕 08/12 20:02
8F：→ puec2:讓子彈再飛一會 08/12 20:10
9F：→ aceliang:機率不會高，就50%，運氣問題 :) 加油 08/12 20:31
10F：→ xxtomnyxx:不會真的是 50%，經驗上有些序列就是很容易都是正接， 08/12 21:12
11F：→ xxtomnyxx:或是挑了幾十顆都是反街的例子也有。 08/12 21:12
12F：→ xxtomnyxx:話說只有 4 顆也太少了吧？ 08/12 21:13