作者j31yo20 (j31yo20)
看板Biotech
标题[求救]yT&A vector问题
时间Mon Aug 12 11:57:27 2013
已经使用yT&A vector做实验很久了，但是最近发现，接到yT&A vector後去定序，
发现要把forward定序完的那一条做reverse-complement才会跟reverse定序完、
原本的sequence符合(通常不是把reverse 那一条作reverse-complement)，这样
让我觉得在把sample做PCR完後，接到yT&A vector上有可能反接吧? 有没有人
跟我发生一样的情况，那只好重做clone吗?
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 120.114.191.88
1F：→ puec2:你如果把TA cloning的原理再看仔细一点就会发现 08/12 14:26
2F：→ puec2:反接是很正常的事 08/12 14:26
3F：推 CD133:一楼正解，不过如果你当初在primer有设计restriction enzyme 08/12 17:24
4F：→ CD133:cutting sites，反接也就没差，不影响你sub-cloning 08/12 17:25
5F：推 poison7202:您的TA还要再多做一点~看看原理吧!! 08/12 19:18
6F：→ j31yo20:这反接的机率有点高 transformation完 长出四颗，都是反接 08/12 20:01
7F：→ j31yo20:ok 谢谢大家噜 08/12 20:02
8F：→ puec2:让子弹再飞一会 08/12 20:10
9F：→ aceliang:机率不会高，就50%，运气问题 :) 加油 08/12 20:31
10F：→ xxtomnyxx:不会真的是 50%，经验上有些序列就是很容易都是正接， 08/12 21:12
11F：→ xxtomnyxx:或是挑了几十颗都是反街的例子也有。 08/12 21:12
12F：→ xxtomnyxx:话说只有 4 颗也太少了吧？ 08/12 21:13