作者loveki1016 (琪)
看板Biotech
標題[求救] western blot band像海鷗
時間Sat Jul 27 01:17:27 2013
各位好
最近western壓小分子量的結果都會這樣
想要請問大家有沒有遇過類似的問題
這張是看分子量14&16壓出來的圖
http://ppt.cc/x0ge
我是用15%的膠，蛋白濃度50ug
然後有試過提高&降低蛋白濃度，但是跑出來還是會有海鷗形狀
濃度越高海鷗幅度越大
跑膠的時候通常是用80V，後來重跑用60V也是一樣
transfer條件是25V，over night，流水
也試過將protein lysis、6X dye換新的
還有看17kDa的histone也是這種情形
實驗室其他人也有這種狀況
但是其他%數的(or大分子量)就沒有這種問題
就只有要看小分子量的蛋白
我跑了好多次都是這樣....
想請問大家知道是哪裡出了問題嗎??
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 1.165.186.99
1F：推 puec2:DNA。 下次sample sonicate一下 07/27 03:03
2F：→ xiphos:sample裡的detergen含量太高？ 07/27 03:05
3F：→ loveki1016:我都有超音波震盪10秒x3次，而且之前都不會有這種band 07/28 16:19
4F：→ loveki1016:上學期都不會這樣的說..... 07/28 16:19
5F：→ puec2:震過還會這樣喔 真神奇 07/28 23:37
6F：推 jsi:換一台power supply看會不會改善 07/28 23:41
7F：推 keyray:以前有遇過類似的情形，那時原因是發生在膠體凝結部分 07/29 23:09
8F：→ keyray:最後是將APS改成fresh prepare才解決 07/29 23:11
9F：推 huuban:推樓上，不過我們實驗室當時也是換掉一些過期的東西就OK 07/30 22:58
10F：推 tchan:順便檢查Tris-HCL的pH值對不對 07/31 02:01