作者loveki1016 (琪)
看板Biotech
标题[求救] western blot band像海鸥
时间Sat Jul 27 01:17:27 2013
各位好
最近western压小分子量的结果都会这样
想要请问大家有没有遇过类似的问题
这张是看分子量14&16压出来的图
http://ppt.cc/x0ge
我是用15%的胶，蛋白浓度50ug
然後有试过提高&降低蛋白浓度，但是跑出来还是会有海鸥形状
浓度越高海鸥幅度越大
跑胶的时候通常是用80V，後来重跑用60V也是一样
transfer条件是25V，over night，流水
也试过将protein lysis、6X dye换新的
还有看17kDa的histone也是这种情形
实验室其他人也有这种状况
但是其他%数的(or大分子量)就没有这种问题
就只有要看小分子量的蛋白
我跑了好多次都是这样....
想请问大家知道是哪里出了问题吗??
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 1.165.186.99
1F：推 puec2:DNA。 下次sample sonicate一下 07/27 03:03
2F：→ xiphos:sample里的detergen含量太高？ 07/27 03:05
3F：→ loveki1016:我都有超音波震荡10秒x3次，而且之前都不会有这种band 07/28 16:19
4F：→ loveki1016:上学期都不会这样的说..... 07/28 16:19
5F：→ puec2:震过还会这样喔 真神奇 07/28 23:37
6F：推 jsi:换一台power supply看会不会改善 07/28 23:41
7F：推 keyray:以前有遇过类似的情形，那时原因是发生在胶体凝结部分 07/29 23:09
8F：→ keyray:最後是将APS改成fresh prepare才解决 07/29 23:11
9F：推 huuban:推楼上，不过我们实验室当时也是换掉一些过期的东西就OK 07/30 22:58
10F：推 tchan:顺便检查Tris-HCL的pH值对不对 07/31 02:01