作者skyofsilver (silversky)
看板Biotech
標題[求救] 請問流式細胞儀的cell cycle上機步驟
時間Sat Jul 20 10:27:49 2013
各位板大好
想請問各位使用流式細胞儀PI染色看cell cycle的機器操作方面
之前老師是有操作給我看過
簡短操作如下(儀器方面): 1. 將FL3(PI)由原先的Log調為Line(線性)
開啟FSC SSC 及 FL3的Histogram
2. 開始上Sample 並調整FSC SSC 並Gate所要看的細胞群
3. 調整FL3的Histogram 調整Sub G1, G1, S, G2/M的位置
4. 調整好之後 開始收取Data
我想問的是: 之前有上過課 聽說PI染劑非常的黏 有時機器會將黏在一起的兩顆細胞
誤判為一顆 (ex. 2n+2n=4n) 所以要做一個步驟排除這種誤判
我在與老師學實驗的時候也有提出這個問題 不過老師卻說不用 但並沒有
說為什麼
想請問各位板大 我們老師這樣的做法是正確的嗎? 還是真的少了哪一個步
驟呢? 謝謝!
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 218.173.34.99
1F：→ roy047:用FSC就能把黏一團的細胞排除在外了吧... 07/20 10:47
2F：→ skyofsilver:喔喔! 所以這種上法是正確的囉? 07/20 11:08
3F：→ roy047:有control組比較應該就沒什問題...畢竟機器操作就那樣 07/20 11:21
4F：→ roy047:在意的話就在上之前先輕輕vortex 07/20 11:22
6F：→ qiet:FSC無法分出來的 07/20 11:32
7F：→ roy047:原po可以參考 我是染PI都沒碰過這問題啦... 07/20 11:41
8F：推 ZnU:5樓正解，請用FL3-W對FL3-A排除doublets 07/20 12:34
9F：推 ZnU:當然像一樓都沒遇過是最好的，這跟cell type也很有關係 07/20 12:36
10F：→ skyofsilver:感謝各位大的解答 所以說明書上p15的方法是要每次上 07/21 11:26
11F：→ skyofsilver:都做嗎? 還是覺得Data怪異再做呢? 07/21 11:27
12F：推 potter:我是都做 反正也沒差到多少時間 07/21 16:00
13F：→ skyofsilver:好! 謝謝各位大大! 我試試看! 07/21 17:13