作者j31yo20 (j31yo20)
看板Biotech
標題[求救] 做細胞transfection的plasmid DNA?
時間Tue Jul 16 12:39:32 2013
之前有做過把plasmid DNA transfection 進入細胞裡，但是細胞幾乎都死亡了
我的plasmid DNA 是從DH5a萃取出來的，我沒有用去內毒素的kit
我想問的是，做transfection 的plasimd DNA 是不是一定要去內毒素呢?
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◆ From: 120.114.191.159
1F：→ roy047:打活體的比較需要 用在細胞我也是用普通kit抽的 07/16 12:40
2F：→ roy047:如果是污染的話較可能是回溶用的水或是transfection時問題 07/16 12:40
3F：推 vancent:沒必要~問題應該是出在你TRANSFECTION的步驟 07/16 12:46
4F：→ j31yo20:我是用polyjet 的reagent 07/16 14:01
5F：→ j31yo20:步驟都是照potocol耶 07/16 14:02
6F：推 puec2:先告訴大家幾個條件 07/16 18:16
7F：→ puec2:1.cell strain, cell number, 12 wells or 6 wells plate? 07/16 18:17
8F：→ puec2:2.amount of DNA, amount of transfection reagent used. 07/16 18:18
9F：→ puec2:3.Brand of transfection reagent. 07/16 18:18
10F：→ puec2:4.Did you use GFP control plasmid 07/16 18:18
11F：推 KittyGod:不去乾淨LPS也許不會使細胞死亡 但微量的LPS一定干擾data 07/17 06:39
12F：→ j31yo20:24well, 0.24*10^6 cell/well, 0.5ug DNA per well, polyj 07/17 10:17
13F：→ j31yo20:et reagent , not use GFP plasmid control 07/17 10:17
14F：→ roy047:cell strain? 2.4*10^5種24well算爆多了@@ 07/17 10:26
15F：→ roy047:貼附型細胞:種完貼隔夜後看細胞狀況 健康才做transfection 07/17 10:34
16F：→ puec2:細胞是蠻滿的..DNA這個量應該還好 除非polyjet剛好對你的 07/17 11:22
17F：→ puec2:細胞毒性特強 07/17 11:23
18F：→ j31yo20:恩恩 我在做做看吧！THX ALL 07/17 19:40
19F：推 icome:應該是polyjet毒性造成的 量稍降低一點 07/17 22:20
20F：推 jsi:沒有target gene的vector control也會產生細胞死亡現象嗎? 07/18 00:08
21F：→ roy047:這要看你vector上有接什麼會表現出protein的東西啊.. 07/18 08:12
22F：→ j31yo20:正在跟老師討論是否要用control plasmids 07/18 11:18