作者j31yo20 (j31yo20)
看板Biotech
标题[求救] 做细胞transfection的plasmid DNA?
时间Tue Jul 16 12:39:32 2013
之前有做过把plasmid DNA transfection 进入细胞里，但是细胞几乎都死亡了
我的plasmid DNA 是从DH5a萃取出来的，我没有用去内毒素的kit
我想问的是，做transfection 的plasimd DNA 是不是一定要去内毒素呢?
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 120.114.191.159
1F：→ roy047:打活体的比较需要 用在细胞我也是用普通kit抽的 07/16 12:40
2F：→ roy047:如果是污染的话较可能是回溶用的水或是transfection时问题 07/16 12:40
3F：推 vancent:没必要~问题应该是出在你TRANSFECTION的步骤 07/16 12:46
4F：→ j31yo20:我是用polyjet 的reagent 07/16 14:01
5F：→ j31yo20:步骤都是照potocol耶 07/16 14:02
6F：推 puec2:先告诉大家几个条件 07/16 18:16
7F：→ puec2:1.cell strain, cell number, 12 wells or 6 wells plate? 07/16 18:17
8F：→ puec2:2.amount of DNA, amount of transfection reagent used. 07/16 18:18
9F：→ puec2:3.Brand of transfection reagent. 07/16 18:18
10F：→ puec2:4.Did you use GFP control plasmid 07/16 18:18
11F：推 KittyGod:不去乾净LPS也许不会使细胞死亡 但微量的LPS一定干扰data 07/17 06:39
12F：→ j31yo20:24well, 0.24*10^6 cell/well, 0.5ug DNA per well, polyj 07/17 10:17
13F：→ j31yo20:et reagent , not use GFP plasmid control 07/17 10:17
14F：→ roy047:cell strain? 2.4*10^5种24well算爆多了@@ 07/17 10:26
15F：→ roy047:贴附型细胞:种完贴隔夜後看细胞状况 健康才做transfection 07/17 10:34
16F：→ puec2:细胞是蛮满的..DNA这个量应该还好 除非polyjet刚好对你的 07/17 11:22
17F：→ puec2:细胞毒性特强 07/17 11:23
18F：→ j31yo20:恩恩 我在做做看吧！THX ALL 07/17 19:40
19F：推 icome:应该是polyjet毒性造成的 量稍降低一点 07/17 22:20
20F：推 jsi:没有target gene的vector control也会产生细胞死亡现象吗? 07/18 00:08
21F：→ roy047:这要看你vector上有接什麽会表现出protein的东西啊.. 07/18 08:12
22F：→ j31yo20:正在跟老师讨论是否要用control plasmids 07/18 11:18