作者w061820 (zerofield)
看板Biotech
標題Re: [求救] 關於細菌蛋白表現
時間Sun Jun 30 21:46:07 2013
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
: ◆ From: 114.38.50.52
: 推 licat:XL1-blue(DE3)也是pET系統常用的host strain之一 06/28 09:35
: → licat:pET系統主要是跟T7 promoter以及DE3有關 建議細讀一下手冊 06/28 09:38
: → KittyGod:XL1-blue非常少看到有人拿它來表現蛋白質耶 06/29 10:00
: → KittyGod:pET system應該是利用T7 promoter搭配T7 polymerase的菌 06/29 10:01
: → KittyGod:XL1-blue好像沒看到有表現T7 polymerase的基因耶 要詳查 06/29 10:02
: → KittyGod:要不要跟老師說一下啊 06/29 10:02
: → KittyGod:我看到的XL1只有拿來保存植體用 06/29 10:03
: → KittyGod:BL21很容易買到 06/29 10:04
不好意思 我現在才想到要上來看...
兩位大大 我不知道要相信誰耶XD
不過學弟已經開始在作了...
我相信他老闆應該不是很懂
因為他老闆是聽來的....
我們實驗室是不會拿XL-1來表現蛋白啦
但是我實在不確定
所以上來問問
話說我要相信誰XD
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◆ From: 114.38.28.169
1F：推 zeroHa:Bl21&bl21star 很常用來表現蛋白，至少我待過的三個lab都是 06/30 23:26
2F：推 zeroHa:以此來表現，除非有特別的因素才會用rosetta或是其他的表現 06/30 23:28
3F：→ zeroHa:保存Plasmid主要是用dh5alpha,因為比較不會有mutation 06/30 23:29
4F：→ j31yo20:有用過dh5a 表現蛋白 還有出現其他顏色的菌落 07/01 10:45
5F：推 shenhsu:一般都用BL21 但有時候表現不出來也會嘗試XL1和DH5a之類的 07/01 12:25
6F：→ jeol1620:XL1-blue 跟 XL1-blue(DE3) 是不一樣的哩，pET質體是T7 07/01 15:32
7F：→ jeol1620:promoter 就只能放XL1-blue(DE3)才能表現，其實應該去查 07/01 15:33
8F：→ jeol1620:菌種原廠的說明書裡頭的基因型，看有沒有把rec之類的拿掉 07/01 15:33
9F：→ KittyGod:有XL1-blue(DE3)的相關資訊嗎? 我一直找不到 有BL21(DE3) 07/01 16:40
10F：→ KittyGod:還有一般的DH5a應該不能應用在pET system 07/01 16:44
11F：推 licat:沒有DE3的話都不能用 有DE3的host則都有一試的價值 07/01 19:31
12F：→ licat:因為有時理論是理論 哪個host適用你的蛋白質還真不試不知道 07/01 19:33
13F：推 licat:實驗室常用的E. coli分為K12與B strain兩種 07/01 19:34
14F：→ licat:BL21是屬於B strain, 常用於cloning的都屬於K12 07/01 19:37
15F：→ licat:因此是可以用XL1-blue(DE3)試試看的 我自己有同時做過 07/01 19:38
16F：→ licat:同一個pET表現質體 在這兩個host中 表現量有很大差異 07/01 19:39
17F：→ jeol1620:剛查了一下XL1-blue 是strategene的產品 07/01 20:40
19F：→ KittyGod:這個stratagen的XL1-blue也是沒寫他有T7 polymerase 07/01 22:34
20F：→ KittyGod:哈哈 我一直查不到市售的XL1-blue(DE3) 所以好奇 07/01 22:38