作者w061820 (zerofield)
看板Biotech
标题Re: [求救] 关於细菌蛋白表现
时间Sun Jun 30 21:46:07 2013
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
: ◆ From: 114.38.50.52
: 推 licat:XL1-blue(DE3)也是pET系统常用的host strain之一 06/28 09:35
: → licat:pET系统主要是跟T7 promoter以及DE3有关 建议细读一下手册 06/28 09:38
: → KittyGod:XL1-blue非常少看到有人拿它来表现蛋白质耶 06/29 10:00
: → KittyGod:pET system应该是利用T7 promoter搭配T7 polymerase的菌 06/29 10:01
: → KittyGod:XL1-blue好像没看到有表现T7 polymerase的基因耶 要详查 06/29 10:02
: → KittyGod:要不要跟老师说一下啊 06/29 10:02
: → KittyGod:我看到的XL1只有拿来保存植体用 06/29 10:03
: → KittyGod:BL21很容易买到 06/29 10:04
不好意思 我现在才想到要上来看...
两位大大 我不知道要相信谁耶XD
不过学弟已经开始在作了...
我相信他老板应该不是很懂
因为他老板是听来的....
我们实验室是不会拿XL-1来表现蛋白啦
但是我实在不确定
所以上来问问
话说我要相信谁XD
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◆ From: 114.38.28.169
1F：推 zeroHa:Bl21&bl21star 很常用来表现蛋白，至少我待过的三个lab都是 06/30 23:26
2F：推 zeroHa:以此来表现，除非有特别的因素才会用rosetta或是其他的表现 06/30 23:28
3F：→ zeroHa:保存Plasmid主要是用dh5alpha,因为比较不会有mutation 06/30 23:29
4F：→ j31yo20:有用过dh5a 表现蛋白 还有出现其他颜色的菌落 07/01 10:45
5F：推 shenhsu:一般都用BL21 但有时候表现不出来也会尝试XL1和DH5a之类的 07/01 12:25
6F：→ jeol1620:XL1-blue 跟 XL1-blue(DE3) 是不一样的哩，pET质体是T7 07/01 15:32
7F：→ jeol1620:promoter 就只能放XL1-blue(DE3)才能表现，其实应该去查 07/01 15:33
8F：→ jeol1620:菌种原厂的说明书里头的基因型，看有没有把rec之类的拿掉 07/01 15:33
9F：→ KittyGod:有XL1-blue(DE3)的相关资讯吗? 我一直找不到 有BL21(DE3) 07/01 16:40
10F：→ KittyGod:还有一般的DH5a应该不能应用在pET system 07/01 16:44
11F：推 licat:没有DE3的话都不能用 有DE3的host则都有一试的价值 07/01 19:31
12F：→ licat:因为有时理论是理论 哪个host适用你的蛋白质还真不试不知道 07/01 19:33
13F：推 licat:实验室常用的E. coli分为K12与B strain两种 07/01 19:34
14F：→ licat:BL21是属於B strain, 常用於cloning的都属於K12 07/01 19:37
15F：→ licat:因此是可以用XL1-blue(DE3)试试看的 我自己有同时做过 07/01 19:38
16F：→ licat:同一个pET表现质体 在这两个host中 表现量有很大差异 07/01 19:39
17F：→ jeol1620:刚查了一下XL1-blue 是strategene的产品 07/01 20:40
19F：→ KittyGod:这个stratagen的XL1-blue也是没写他有T7 polymerase 07/01 22:34
20F：→ KittyGod:哈哈 我一直查不到市售的XL1-blue(DE3) 所以好奇 07/01 22:38